缺氧对内毒素耐受的THP-1细胞免疫功能的影响

目的 观察缺氧对发生内毒素耐受(endotoxin tolerance,ET)的人单核巨噬细胞(human mononuclear mac-rophages,T HP-1)免疫功能的影响并探讨其可能机制.方法 T HP-1细胞接受革兰氏阴性菌脂多糖(lipopolysaccha-ride,LPS)一次打击后分为四组.空白组:去除干预因素后继续培养,缺氧组:在空白组基础上予以氯化钴(CoCl2)处理,对照组:在空白组基础上予以LPS二次打击以形成ET,实验组:在空白组基础上给与缺氧及LPS二次打击.收集各组细胞总核糖核酸(ribonucleic acid,RNA),实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time-polymerase chain reac-tion,qPCR)检测白细胞介素1β(interleukin-1 beta,IL-1β)、白细胞介素12(interleukin-12,IL-12)、白细胞介素10(inter-leukin-10,IL-10)、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、CD80、CD40、胶原结构巨噬细胞受体(macrophage receptor with collagenous structure,MARCO)及缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1 alpha,HIF-1α).收集各组细胞上清液,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞因子IL-1β、IL-12、IL-10及TGF-β1表达;蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞因子CD80、CD40、MARCO及HIF-1α蛋白表达.结果 qPCR结果显示,与对照组相比,实验组IL-1β、IL-12、CD80及CD40转录上调(P<0.05);但IL-10、TGF-β1及MARCO的转录下调(P<0.05).ELISA结果显示,与对照组相比,实验组IL-1β及IL-12分泌增加、IL-10及TGF-β1减少(P<0.05).Western blot结果显示,与对照组相比,实验组CD80及CD40蛋白表达增加、MARCO蛋白表达减少(P<0.05).与空白组和缺氧组相比,实验组及对照组的HIF-1α基因转录及蛋白表达均增加(P<0.05);但与对照组相比,实验组HIF-1α基因转录及蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 缺氧可破坏LPS诱导的THP-1细胞ET状态,从而加重炎症反应,该现象可能未通过影响HIF-1α而实现.

Effects of Hypoxia on Immune Function in Endotoxin Tolerance THP-1 Cells