SYBR GreenI实时荧光定量多重PCR快速筛查葡萄球菌中常见大环内酯类耐药基因

目的评价SYBR Green I实时荧光定量多重PCR结合熔解曲线分析快速筛查葡萄球菌常见大环内酯类耐药基因的可行性，利用此筛查方法了解深圳地区葡萄球菌中大环内酯类耐药基因的分布情况。方法选取经测序鉴定携带有大环内酯类耐药基因ermA，ermB，ermC，msrA的葡萄球菌，用一个包括这四种耐药基因引物的SYBRGreenI多重实时荧光定量PCR检测，经荧光定量曲线和熔解温度曲线（Tm值）确证和反应条件优化后建立针对大环内酯类常见耐药基因的初筛体系；随机选取临床136株葡萄球菌，利用此初筛体系对136株葡萄球菌是否携带常见大环内酯类耐药基因进行检测，并对检测结果和表型、电泳、测序结果进行比较，从而对此方法进行评价。对携带有大环内酯类耐药基因的细菌进行基因型别的鉴定，以了解大环内酯类耐药基因的分布情况。结果此SYBR GreenI实时荧光定量多重PCR初筛体系检测葡萄球菌常见大环内酯类耐药基因与表型检测比较达到94．8％（129／136）的一致性，与琼脂糖凝胶电泳结果和测序结果比较达到100％的一致性。136株葡萄球菌检出msrA，ermA，ermB，ermC四种耐药基因，耐药基因总检出率为75．7％（103／136），并发现多株携带多种大环内酯类耐药基因的葡萄球菌。结论SYBR GreenI实时荧光定量多重PCR可以快速准确地筛查葡萄球菌是否携带有常见的大环内酯类耐药基因；深圳地区葡萄球菌大环内酯类耐药率较高，主要耐药基因是ermC 56．6％（77／136），msrA24．2％（33／136），ermA12．5％（17／136）。