PCR产物与结核分支杆菌分子信标杂交优化及荧光检测的初步实验研究

目的建立PCR反应后再加入结核分支杆菌分子信标杂交试验,优化杂交条件。并对分子信标PCR杂交产物荧光信号的观测条件进行摸索。方法通过对杂交温度、杂交时间以及杂交方式的优化,建立PCR反应后再加入TB分子信标杂交试验。运用荧光分光光度计和荧光显微镜对MBPCR杂交产物荧光信号的观测条件进行摸索。并进行不同荧光.淬灭分子对标记分子信标的观测试验。结果PCR反应后再加入TB分子信标杂交试验中水浴、PCR仪、恒温摇床的最适杂交温度和适杂时间分别为：55℃,6h;55℃,4h;50℃,7h。阴-阳性效果区分;水浴〉恒温摇床〉PCR仪。荧光分光光度仪检测MBPCR杂交阳性产物、MBPCR杂交阴性产物（茎环结构未打开）、无游离分子信标探针PCR产物（空白对照）三者的荧光光亮度比值为：6.102／0.136／0.003。荧光显微镜观测MBPCR杂交阳性产物、MBPCR杂交阴性产物（茎环结构未打开）荧光强度明显区别。本试验Cy3-BDH组成分子信标荧光-淬灭效率较cy3-DABCLYE高,FAM-DABCLYE组成分子信标荧光-淬灭效率较FAM-BDH高。结论建立起结核分支杆菌分子信标荧光芯片的检测技术,包括样本制备、芯片制备、杂交反应以及扫描和图像分析等方法。并兼顾到各种因素对单侧延长臂分子信标芯片的影响,对反应体系中各条件进行了合理的优化,使所建立的检测体系稳定可靠。

Investigation on the optimizing of the hybridization of PCR product with the molecular beacon of bacillus tuberculosis and the fluorescence detection of bacillus tuberculosis.