| huIL-6-GM-CSF(9-127)融合蛋白的表达及活性测定 |
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| 引用本文： | 孙强明,戴长柏,李洪钊,丁云菲,马雁冰,刘红岩,徐维明. huIL-6-GM-CSF(9-127)融合蛋白的表达及活性测定[J]. 免疫学杂志, 2002, 18(4): 253-257 |
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| 作者姓名： | 孙强明 戴长柏 李洪钊 丁云菲 马雁冰 刘红岩 徐维明 |
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| 作者单位： | 中国协和医科大学中国医学科学院医学生物学研究所分子生物室,云南,昆明,650118 |
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| 基金项目： | 云南省自然科学青年基金资助项目 (2 0 0 1C0 0 31Q) |
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| 摘 要： | 目的 构建及表达具有huIL 6和huGM CSF双重生物学活性的huIL 6 GM CSF(9- 12 7)融合蛋白分子。方法 应用PCR技术对huIL 6和huGM CSF的基因分别加以改造 ,同时在二者之间加上连接肽序列 (G G S G S) 3 ,克隆PCR产物 ,并构建成pBV2 2 0 IL 6 GM CSF(9- 12 7)表达质粒 ,将表达质粒导入E .coliDH5α中 ,诱导表达融合蛋白。通过QSepharoseH .P .离子交换柱和SephacrylS 2 0 0分子筛柱二步柱纯化以获取目的蛋白。使用MTT法测量其huIL 6和huGM CSF生物学活性。结果 pUC18 IL 6 GM CSF(9- 12 7)的序列与理论设计完全一致 ,表达质粒在E .coliDH5α中得到高效表达 ,表达的融合蛋白占总蛋白含量的 30 %以上 ,表达产物以包涵体的形式存在。通过QSepharoseH .P .离子交换柱和SephacrylS 2 0 0分子筛柱二步柱纯化及复性后获得目的蛋白 ,其纯度达到 96 %以上。融合蛋白具有huIL 6和huGM CSF的双重生物学活性 ,其促进huIL 6依赖细胞株B9和huGM CSF依赖细胞株TF 1增殖的比活性分别为 2 .86× 10 7U/mg和 3.33× 10 8U/mg。结论 获得了具有较高纯度和双重生物学活性的huIL 6 GM CSF(9- 12 7)融合蛋白
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| 关 键 词： | GM－CSF 融合蛋白 基因表达 基因克隆 白细胞介素－6 生物活性蛋白 |
| 文章编号： | 1000-8861(2002)04-0253-05 |
| 修稿时间： | 2002-01-04 |
Expression of huIL-6-GM-CSF(9-127) fusion protein and its biologic activities |
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| SUN Qiang ming,DAI Chang bai,LI Hong zhao,DING Yun fei,MA Yan bing,LIU Hong yan,XU Wei ming. Expression of huIL-6-GM-CSF(9-127) fusion protein and its biologic activities[J]. Immunological Journal, 2002, 18(4): 253-257 |
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| Authors: | SUN Qiang ming DAI Chang bai LI Hong zhao DING Yun fei MA Yan bing LIU Hong yan XU Wei ming |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | IL 6 GM CSF fusion protein cloning gene expression |
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