乙型肝炎病毒恩替卡韦耐药株的全基因组克隆与序列分析

目的:从慢性乙型肝炎恩替卡韦临床耐药的患者血清中,应用高保真聚合酶长距离扩增、克隆乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)全基因组序列,建立HBV恩替卡韦耐药株的全长基因克隆。方法:从3例恩替卡韦临床耐药的慢性乙型肝炎患者血清中提取HBV DNA,应用高保真聚合酶对3 200 bp的HBV DNA进行全序列扩增,通过克隆技术构建PGEM-HBV重组质粒,DNA测序后进行序列分析。结果:获得1株恩替卡韦基因耐药的HBV DNA全长序列克隆,序列长度为3 216 bp,序列分析发现在逆转录区有L180M、M204V、T184G位点变异。结论:构建了恩替卡韦基因耐药的HBV DNA全长序列克隆,为进一步研究HBV耐药株提供工具。