| 金葡菌TG-TPase嵌合基因在甲醇营养型酵母中的表达 |
| |
| 引用本文： | 杨杰,饶贤才,侯瑞,胡晓梅,陈志瑾,丛延广,谭银铃,朱军民,周莹冰,胡福泉.金葡菌TG-TPase嵌合基因在甲醇营养型酵母中的表达[J].免疫学杂志,2009,25(2). |
| |
| 作者姓名： | 杨杰 饶贤才 侯瑞 胡晓梅 陈志瑾 丛延广 谭银铃 朱军民 周莹冰 胡福泉 |
| |
| 作者单位： | 第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆市微生物工程实验室,重庆,400038
|
| |
| 摘 要： | 目的 设计耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)耐药相关TG-Tpase嵌合基因,构建其真核表达质粒,为嵌合基因的高效、分泌型表达奠定基础.方法 在序列结构分析的基础上,设计引物从MRSA菌株中扩增其耐药性相关转糖基酶(Tgase)和转肽酶(Tpase)活性片段,进一步用酶切连接等分子生物学操作构建TG-Tpase嵌合基因,亚克隆至酵母表达质粒pPIC9K中,转化DH5a大肠埃希菌.经酶切、PCR和核苷酸测序鉴定正确的重组质粒用Sal I线性化,整合入甲醇营养型毕赤酵母GS115中,在DNA和基因转录水平鉴定出阳性重组酵母.结果 采用PCR从MRSA基因组中扩增得到了873 bp的Tgase片段和1 044 bp的Tpase片段.以酶切连接构建的TG-Tpase嵌合基因经酶切、PCR鉴定,能获得约1 900 bp的融合片段,与预期结果 相符,测序表明序列和阅读框均正确.线性化的重组质粒转化GS115后,得到5个高拷贝阳性转化子,经诱导表达和PCR鉴定,这些转化子能转录出目的基因的mRNA.结论 成功构建了含TG-Tpase嵌合基因的重组毕赤酵母工程菌,为进一步高效制备嵌合蛋白、进而利用其酶学活性进行抗耐药性金葡菌抑制剂的筛选创造前提.
|
| 关 键 词： | 毕赤酵母 |
Expression of TP-TGase chimera derived from methicillin-resistant Staphylococcus aureus in the methylotrophic yeast |
| |
| YANG Jie,RAO Xiancai,HOU Rui,HU Xiaomei,CHEI Zhijing,CONG Yangguang,TAN Yingling,ZHU Junming,CHOU Yingbing,HU Fuqiuan.Expression of TP-TGase chimera derived from methicillin-resistant Staphylococcus aureus in the methylotrophic yeast[J].Immunological Journal,2009,25(2). |
| |
| Authors: | YANG Jie RAO Xiancai HOU Rui HU Xiaomei CHEI Zhijing CONG Yangguang TAN Yingling ZHU Junming CHOU Yingbing HU Fuqiuan |
| |
| Institution: | YANG Jie,RAO Xiancai,HOU Rui,HU Xiaomei,CHEI Zhijing,CONG Yangguang,TAN Yingling,ZHU Junming,CHOU Yingbing,HU Fuqiuan Department of Microbiology,Third Military Medical University,Chongqing,400038 China |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | MRSA TPase TGase |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
