利福平抑制鱼藤酮诱导PC12细胞的凋亡:通过减轻线粒体氧化应激可能实现? |
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引用本文: | 陈世文,孙元林,曾志芬,陶恩祥.利福平抑制鱼藤酮诱导PC12细胞的凋亡:通过减轻线粒体氧化应激可能实现?[J].中国神经再生研究,2010,5(4):251-256. |
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作者姓名: | 陈世文 孙元林 曾志芬 陶恩祥 |
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作者单位: | 中山大学附属第二医院神经内科,中山大学附属第二医院神经内科,中山大学附属第二医院神经内科,中山大学附属第二医院神经内科 |
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基金项目: | 广东省自然基金资助,编号:7001599 |
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摘 要: | 背景:研究已表明利福平能在体内、外实验起重要的神经保护作用。尽管介导这一效应的确切机制尚不清楚,但一些研究提示利福平可能是通过拮抗线粒体功能障碍和氧化应激作用。
目的:探讨利福平对鱼藤酮诱导的分化PC12细胞线粒体氧化应激的保护作用和分析其可能机制。
设计、时间和地点:本实验是从2007年12月至2008年11月在中山大学附属第二医院神经科进行的随机重复测量的细胞实验。
材料:PC12细胞由中山大学中山医学院生理实验室馈赠。MTT购自美国MB chem.公司。鱼藤酮,利福平,罗丹明123,DCFH-DA,Hoechst 33342及Annexin V-FITC 凋亡检测试剂盒购自美国Sigma公司。还原型和氧化型谷胱甘肽测定试剂盒和蛋白定量试剂盒购自中国江苏碧云天生物技术研究所。
方法:PC12细胞经100 ng/ml 7S神经生长因子处理九天成分化细胞后培养于含有10%胎牛血清的DMEM/F12中,并孵育在含5% CO2的37 ℃培养箱中。隔天更换培养基。根据不同的处理条件分成六组:对照组(常规加培养基)、利福平组(300μmol/L利福平作用26h)、鱼藤酮组(2.5μmol/L鱼藤酮作用24h)和三组利福平预处理组(先分别给予100, 200 and 300 μmol/L利福平预处理2h,然后2.5μmol/L鱼藤酮再作用24h)。
主要结果测量:(1)MTT检测细胞活性;(2)Hoechst 33342核染和流式细胞仪检测细胞凋亡;(3)荧光显微镜和流式细胞仪测量经罗丹明123标记的线粒体膜电位;(4)流式细胞仪分析DCFH-DA标记的细胞内活性氧生成和酶标仪检测细胞内还原型谷胱甘肽。
结果:鱼藤酮诱导分化PC12细胞凋亡增加同时伴有细胞线粒体膜电位丢失、活性氧生成及谷胱甘肽耗竭;当细胞经过100, 200 and 300 μmol/L利福平预处理后,鱼藤酮诱导的这一线粒体功能障碍能够被利福平以剂量依赖方式所阻断。
结论:利福平预处理的分化PC12细胞能够通过减轻线粒体功能异常和氧化应激阻断鱼藤酮诱导的细胞凋亡。
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关 键 词: | PC12细胞 利福平 鱼藤酮 线粒体功能异常 氧化应激 凋亡 |
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