二氢叶酸还原酶活力测定方法的建立及在基因转移中的应用 |
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作者姓名: | 刘学英 魏康 |
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作者单位: | 军事医学科学院放射医学研究所,军事医学科学院放射医学研究所 |
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摘 要: | 二氢叶酸还原酶(DHFR)可催化二氢叶酸还原生成四氢叶酸。在此过程中还原型辅酶Ⅱ(TPNH)作为递氢体而消耗,其浓度随反应进行而下降。本文用分光光度法测定该酶活力,通过测定 TPNH 特征性的340nm 光吸收下降速度来表示酶活力。材料与方法 1.试剂:①缓冲液Ⅰ取250mmol/L Tris-HCl 缓冲液10ml,12.5mmol/L MgCl_210ml,750mmol/L KCl 10ml,15mmol/L 硫苏糖醇(DTT)1ml,水19ml 配成。②缓冲液Ⅱ500mmol/L Tris-HCl,
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