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编码大鼠Nogo受体mRNA的shRNA重组腺病毒载体的构建和鉴定
引用本文:张沁丽,秦新月,殷成,彭彦.编码大鼠Nogo受体mRNA的shRNA重组腺病毒载体的构建和鉴定[J].第四军医大学学报,2008,29(1):55-58.
作者姓名:张沁丽  秦新月  殷成  彭彦
作者单位:1. 重庆医科大学附属第一医院神经内科,重庆市神经病学重点实验室
2. 重庆医科大学组织胚胎学教研室,重庆,400016
基金项目:国家自然科学基金,教育部回国人员科研启动项目,重庆市医学科技计划
摘    要:目的:构建Nogo受体(NgR)特异性shRNA重组腺病毒载体,为应用基因沉默技术从转录后水平进行缺血性脑损伤的基因治疗研究奠定基础.方法:将前期构建的大鼠Nogo受体mRNA的shRNA特异性真核表达载体pGenesil-1-shRNA的表达启动子U6连同shRNA亚克隆至穿梭质粒pAdTrack,酶切及DNA测序鉴定后,将含NgR基因的重组穿梭质粒pAdTrack-U6-shRNA经PmeI线性化后转化入pAdEasy-1感受态细菌.将pAd-U6-shRNA质粒经PacI线性化后转染293细胞,包装重组腺病毒Adeno-U6-shRNA,并进行PCR鉴定、PCR产物测序及病毒滴度测定.结果:结果证实pAdTrack-U6-shRNA及pAd-U6-shRNA质粒构建正确,收获病毒后的PCR及DNA测序结果证明Adeno-U6-shRNA包被成功.结论:成功构建了大鼠Nogo受体mRNA的shRNA重组腺病毒载体Adeno-U6-shRNA,将为应用基因沉默技术研究NgR在缺血性脑损伤后神经再生中的作用奠定基础.

关 键 词:Nogo受体  RNA干扰  腺病毒
文章编号:1000-2790(2008)01-0055-04
收稿时间:2007-10-09
修稿时间:2007-11-12

Construction and identification of recombinant adenovirus expressing the shRNA of rat Nogo-66 receptor
ZHANG Qin-Li,QIN Xin-Yue,YIN Cheng,PENG Yan.Construction and identification of recombinant adenovirus expressing the shRNA of rat Nogo-66 receptor[J].Journal of the Fourth Military Medical University,2008,29(1):55-58.
Authors:ZHANG Qin-Li  QIN Xin-Yue  YIN Cheng  PENG Yan
Abstract:
Keywords:Nogo-66 receptor  RNAi  adenoviruses
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