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| 抗人禽流感病毒H5N1人源化单链抗体噬菌体文库的构建和筛选 | |
| 引用本文： | 黄吉城,武婕,郭波旋,张宏斌,相大鹏,师永霞,李小波,洪烨,郑夔,幸芦琴,杨晓. 抗人禽流感病毒H5N1人源化单链抗体噬菌体文库的构建和筛选[J]. 中华微生物学和免疫学杂志, 2009, 29(10). DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2009.10.007 |
| 作者姓名： | 黄吉城 武婕 郭波旋 张宏斌 相大鹏 师永霞 李小波 洪烨 郑夔 幸芦琴 杨晓 |
| 作者单位： | 1. 广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心,广州,510623 2. 广东省疾病预防控制中心 3. 广州军区广州总医院 |
| 基金项目： | 国家专项科技计划项目，国家质检总局科技计划项目 |
| 摘 要： | 目的 利用抗人禽流感病毒H5N1 IgG抗体阳性的人禽流感康复患者外周血淋巴细胞,构建人源化Fv段单链抗体(seFv)噬菌体文库,并筛选与禽流感病毒相关蛋白有结合活性的scFv抗体文库.方法 提取人外周血淋巴细胞总RNA,逆转录成cDNA,以其为模板,利用家族特异性IgG基因的引物,扩增重链和轻链的可变区基因,并用合成的连接子将轻链和重链基因连接成单链抗体片段后,重组到噬菌粒载体pCANTAB5E中.将重组噬菌粒载体电转化大肠杆菌TG1,酶切和PCR鉴定抗体库的重组率,通过测定噬菌体抗体库的滴度计算抗体库的库容,用特异性禽流感病毒相关蛋白筛选表达的单链抗体.结果 构建了源于人禽流感康复患者血清的scFv抗体文库,库容为3.75×104;筛选出与禽流感病毒相关蛋白有结合活性的scFv抗体文库.结论 成功构建了抗人禽流感病毒H5N1的人源scFv噬菌体抗体库,并筛选出特异性结合人禽流感病毒相关蛋白的单链抗体,为进一步制备快速检测试剂和治疗研究提供了基础数据. |
| 关 键 词： | 人禽流感病毒H5N1 人源化单链抗体 噬菌体文库 构建 筛选 |
Construction and screening of phage antibody library for scFv fragment from recovery phase patient infected with H5N1 virus |
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| Abstract: | |
| Keywords: | Human H5N1 virus Humanized single chain antibody Phage library Construction Screening |
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