| CEA单链抗体表达质粒构建及产物纯化 |
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| 引用本文： | 李彪,朱承谟,吴祥甫. CEA单链抗体表达质粒构建及产物纯化[J]. 上海交通大学学报(医学版), 2000, 20(3): 203-206 |
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| 作者姓名： | 李彪 朱承谟 吴祥甫 |
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| 作者单位： | 上海第二医科大学瑞金医院核医学科!上海200025(李彪，朱承谟)，中国科学院上海生物化学研究所(吴祥甫) |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 !(39770 2 31 )，上海市启明星计划 !(98Q1 4 0 1 1 ) |
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| 摘 要： | 目的单链抗体基因的构建并在大肠杆菌中进行表达以及表达产物的纯化研究。 方法采用重组PCR技术将已获得的抗癌胚抗原 (CEA)鼠源单克隆抗体E7B10 重、轻链可变区基因 (VH、Vk)经 (Gly4 Ser) 3 编码的寡核苷酸拼接成单链抗体基因 ,并在大肠杆菌中表达了单链抗体C端融合 6×His蛋白 ,表达产物经Ni2 -IDASepharose 6B亲和柱纯化。 结果表达的融合蛋白在胞内主要以可溶性存在 ,其表达量达到菌体总蛋白的 10 % ,SDS -PAGE和Western印迹图谱显示表达产物分子量为 2 7kd ,与其基因编码蛋白的理论推算值相符。表达产物经Ni2 -IDASepharose 6B亲和柱纯化 ,纯度可达 90 %以上 ,得率为 0 .8mg/ 10 0ml。 结论纯化后的融合蛋白具有CEA结合活力 ,其亲和常数为 5 .4× 10 7/M(抗体结合浓度 ) ,略低于其亲本单抗E7B10 2 .7× 10 9/M。
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| 关 键 词： | 单链抗体 CEA 质粒 结直肠肿瘤 放射免疫显像 |
Expression Vector Construction and Prodoct Purification of Single-Chain Antibody with Specificity for Carcinoembryonic Antigen in E.coli |
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| LI Biao,ZHU Chengmo,WU Xiangfu. Expression Vector Construction and Prodoct Purification of Single-Chain Antibody with Specificity for Carcinoembryonic Antigen in E.coli[J]. Journal of Shanghai Jiaotong University:Medical Science, 2000, 20(3): 203-206 |
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| Authors: | LI Biao ZHU Chengmo WU Xiangfu |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | carcinoembryonic antigen single chain antibody gene recombinant PCR gene expression purification |
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