类固醇生成因子-1基因沉默在介导血管紧张素Ⅱ对醛固酮分泌调控的影响

目的 观察血管紧张素Ⅱ(ATⅡ)刺激人肾上腺皮质癌H295R细胞后醛固酮合成酶(CYP11B2)mRNA及醛固酮激素的改变,探讨类固醇生成因子-1(SF-1)基因沉默在介导该反应中的作用.方法 用携带U6启动子和SF-1特异性短发夹RNA(shRNA)序列的质粒载体pGenesil1-SF-1-shRNA及含非特异性shRNA编码序列的阴性对照质粒pGenesill-negative-shRNA转染人肾上腺皮质癌H295R细胞,应用Westem blot和荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测SF-1表达的改变,以100 nmol/L浓度ATⅡ刺激实验组和对照组细胞,检测ATⅡ刺激后3、6、9、12、15、18 h时间点CYP11B2 mRNA表达水平,与未刺激时对比,检测两组细胞CYP11B2 mRNA的最大增幅.用放射免疫法测定醛固酮激素在ATⅡ刺激24 h后的分泌水平,对比两组细胞醛固酮增幅.结果 实验组细胞SF-1在蛋白水平和mRNA水平分别下降了69.07%和71.20%(P＜0.01).ATⅡ刺激后12 h时CYP11B2 mRNA表达水平最高,与未刺激前比较,实验组和对照组的CYP11B2 mRNA增幅分别是50.21倍和800.09倍(P＜0.01),后者是前者的15.93倍(P＜0.01).同样,ATⅡ刺激后醛固酮激素分泌水平均升高,对照组细胞刺激前后分别为(0.061±0.007)μg/L和(0.256±0.014)μg/L(P＜0.01);而实验组醛固酮激素在ATⅡ刺激前后则分别为(0.101±0.010)μg/L和(0.252±0.016)μg/L(P＜0.01),两组比较,前者增幅高于后者1.7倍(P＜0.01).结论 SF-1表达下调可以降低CYP11B2 mRNA及醛固酮对ATⅡ的敏感性和反应性.