靶向β-catenin的shRNA抑制结肠癌细胞增殖的体外实验研究

目的探讨靶向β-catenin的shRNA对结肠癌细胞Colo205的WNT通路的阻断和该基因沉默效应对结肠癌细胞在体外的生长抑制作用。方法构建靶向β-catenin的shRNA载体质粒和阴性对照载体.然后分别转染人结肠癌细胞Colo205。用RT-PCR和Western印迹法检测β-catenin的mRNA和蛋白的表达情况，细胞免疫荧光染色法检测β-catenin蛋白的表达。噻唑蓝实验评价转染后各组细胞的体外增殖情况。软琼脂集落形成实验检测各组细胞的非锚着依赖性生长的能力。结果成功构建了靶向β-catenin的shRNA和阴性对照质粒载体。特异性靶向β-catenin的shRNA能够明显下调β-catenin mRNA，并抑制β-catenin蛋白的表达，其抑制率分别为47.89％和45.26％（P〈0.05）。转染了特异性shRNA的实验组（CAT组）细胞增殖在转染后呈现随时间延长而进行性抑制的现象。在转染后72h，CAT组的细胞存活率为48.5％。与空白对照组的91.3％相比明显降低（P〈0.05）。在软琼脂里CAT组的细胞克隆数目（9个）明显少于空白对照组（46个）和阴性对照组（43个）（P〈0.05）。结论靶向β-catenin的特异性shRNA对结肠癌Colo205细胞具有沉默β-catenin基因表达从而阻断WNT信号通路的作用，并且能够有效地在体外抑制结肠癌细胞的增殖。