刚地弓形虫ROP11基因的克隆及生物信息学分析北大核心CSCD |
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作者姓名: | 张晓磊张进顺贾晓晖徐云鹏张颖王春苗王燕卢致民赵建玲贾天军 |
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作者单位: | 1.河北北方学院病原生物与免疫学研究所075000; |
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基金项目: | 河北省高等学校科学技术研究重点项目(No.ZH2012010)~~ |
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摘 要: | 提取刚地弓形虫(Toxoplasmagondii)RH株速殖子总RNA,根据棒状体蛋白11(ROP11全长编码序列(登录号为DQ077905)的开放阅读框设计引物并进行逆转录PCR(RT-PCR)扩增,PCR产物经EcoRI和NotI酶切后与原核表达载体pGEX-6P-2连接,重组质粒转化大肠埃希菌(E.coli)XL-Blue,阳性菌落经PCR和双酶切鉴定,并测序。对所得序列进行生物信息学分析。结果显示,RT-PCR扩增产物约为1500bp。菌落PCR及双酶切结果正确。测序结果显示,获得的ROP11基因片段为1548bp(登录号为KC456639),与GenBank上已有的弓形虫ROP11序列相比,序列一致性为99%。生物信息学分析发现,ROP11编码蛋白质的预期相对分子质量为M57020,包括有12个保守结构区域,其前26个氨基酸残基构成信号肽,丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化区域位于170~511氨基酸,且有2个潜在的N-糖基化位点。
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关 键 词: | 刚地弓形虫 棒状体蛋白11 原核表达 生物信息学分析 |
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