刚地弓形虫ROP11基因的克隆及生物信息学分析北大核心CSCD

提取刚地弓形虫（Toxoplasmagondii）RH株速殖子总RNA，根据棒状体蛋白11（ROP11全长编码序列（登录号为DQ077905）的开放阅读框设计引物并进行逆转录PCR（RT-PCR）扩增，PCR产物经EcoRI和NotI酶切后与原核表达载体pGEX-6P-2连接，重组质粒转化大肠埃希菌（E．coli）XL-Blue，阳性菌落经PCR和双酶切鉴定，并测序。对所得序列进行生物信息学分析。结果显示，RT-PCR扩增产物约为1500bp。菌落PCR及双酶切结果正确。测序结果显示，获得的ROP11基因片段为1548bp（登录号为KC456639），与GenBank上已有的弓形虫ROP11序列相比，序列一致性为99％。生物信息学分析发现，ROP11编码蛋白质的预期相对分子质量为M57020，包括有12个保守结构区域，其前26个氨基酸残基构成信号肽，丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶催化区域位于170～511氨基酸，且有2个潜在的N-糖基化位点。