抗人EGFRvⅢex单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的研制抗人表皮生长因子受体突变体Ⅲ胞外区(EGFRvⅢex)单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。方法采用原核表达的EGFRvⅢex蛋白免疫BALB/c小鼠,以间接ELISA法筛选分泌特异性mAb的杂交瘤细胞,采用蛋白印迹、间接免疫荧光和免疫组化染色鉴定mAb的特异性。结果获得1株可稳定分泌mAb的杂交瘤细胞株。mAb的Ig亚类为IgM,效价为10-6。mAb可识别U87细胞膜上稳定转染的人EGFRvⅢex和SPC-A1细胞膜上高表达的EGFR。结论成功制备1株抗EGFRvⅢex的mAb,经蛋白印迹、免疫荧光和免疫组化染色检测,mAb的特异性良好,能够检测细胞上的EGFR和EGFRvⅢex,为肿瘤的治疗提供了良好的手段。