新型温敏性重组人釉原蛋白载体与传统丙二醇藻酸酯载体的体外测试效果比较

目的评价新型温敏性重组人釉原蛋白（rhAm）载体和传统丙二醇藻酸酯（PGA）载体的体外表征和对人牙周膜成纤维细胞活性的影响。方法分别利用3.3%PGA与rhAm混合制备PGA-rhAm，2%的壳聚糖（CS）和rhAm混合并使用质量分数60%的β-甘油磷酸钠溶液（βGP）作为交联剂制备CS-βGP-rhAm凝胶；表征通过检测黏度、凝固时间、pH值、溶胀率、体外生物降解率和缓释性能来评估；通过观察金黄色葡萄球菌生长状况比较材料的抗菌效果；生物相容性评估是在人牙周膜成纤维细胞（hPDLFs）上利用CCK8检测各组细胞增殖能力，划痕实验检测细胞迁移能力，RT-qPCR检测成骨基因mRNA表达，Western blot检测蛋白的表达水平，碱性磷酸酶（ALP）染色检测各组细胞成骨分化情况。结果PGA-rhAm具有黏度值3.262±0.055 Pa.s，CS-βGP-rhAm在37 ℃下具有6 min凝固成型能力、接近口腔环境的pH值、约90%的溶胀率，同时缓释rhAm可维持2周以上，自身降解时间维持3周以上。CS-βGP负载rhAm相比PGA负载rhAm更有效抑制金黄色葡萄球菌生长（P < 0.001）。细胞水平上，CS-βGP是否负载rhAm都可促进细胞增殖（P < 0.001），PGA促进细胞增殖效果不显著。划痕实验显示，CS-βGP和PGA负载rhAm后均可促进细胞迁移（P < 0.01）。RT-qPCR和Western blot结果显示，CS-βGP负载rhAm能促进RUNX2、OCN mRNA水平（P < 0.001），上调Ki67（P < 0.001）、RUNX2（P < 0.001）、Collagen Ⅰ（P < 0.01）、β-catenin（P < 0.05）蛋白表达。PGA负载rhAm促进RUNX2（P < 0.05）、OCN（P < 0.01）mRNA水平表达，蛋白水平变化无统计学意义。CS-βGP组ALP染色蓝紫色颗粒数增加，PGA组无明显变化。结论CS-βGP具有能缓释rhAm的性能，同时相比传统的PGA载体，CS-βGP具有温度成型的特点、抑制金黄色葡萄球菌生长的性能、显著提高hPDLFs的生物活性并且负载rhAm后不影响其生物活性。