脊髓背角环磷酸腺苷直接激活的交换蛋白在大鼠炎性痛中的作用

【摘要】 目的 探讨大鼠脊髓背角环磷酸腺苷（cAMP）直接激活的交换蛋白（Epac）在炎性痛调节过程中的作用。方法 清洁级健康成年雄性SD大鼠84只，3月龄，体重230~250 g，其中非模型鼠20只，模型鼠64只；采用双侧后爪趾底皮下注射弗氏完全佐剂（CFA）100 μL建立炎性痛模型（以下称为建模）。采用Western blot法于建模前、建模后1、3、6、9、14天大鼠脊髓腰膨大检测Epacl、Epac2蛋白相对含量，每组4只；采用免疫荧光法检测脊髓背角Epacl阳性细胞数，每组4只。实验随机分为三组：对照组（C组）、生理盐水组（NS组）和Epac激动剂组（8p-CPT组），每组12只，C组为非模型鼠，未做任何处理，NS组和8p-CPT组为模型鼠，分别于建模后6天，鞘内给予NS、Epac激动剂8p-CPT（8p-CPT-2′-O-Me-cAMP）10 μL（以下称为给药）。于建模前1 h、给药前1 h、给药后30 min、1 h、2 h和3 h测定热刺激缩足潜伏期（TWL），观察大鼠痛行为学变化；于给药后1 h采用免疫荧光法检测三组大鼠脊髓背角即刻早期基因蛋白c-Fos阳性细胞数。结果 建模后3、6天脊髓腰膨大Epacl蛋白相对含量明显低于建模前和建模后1天（0.74±0.09和0.77±0.08分别比1.00±0.00和 0.99±0.07，P < 0.05），Epac2蛋白相对含量各时点差异均无统计学意义。建模后3、6、9、14天脊髓背角Epac1阳性细胞数明显低于建模前（34.25±4.99）个、（24.00±8.04）个、（31.50±3.51）个和（43.00±8.98）个分别比（61.75±4.99）个，P < 0.05]，建模后3、6、9天脊髓背角Epac1阳性细胞数明显低于建模后1天（34.25±4.99）个、（24.00±8.04）个和（31.50±3.51）个分别比（58.00±5.35）个，P < 0.05]。给药前1 h、给药后30 min、1 h、2 h和3 h NS组和8p-CPT组TWL均明显低于C组（6.8±1.0）s和（7.1±0.8）s分别比（13.3±1.6）s，（7.3±0.9）s和（9.2±1.0）s分别比（13.2±1.5）s，（6.9±1.2）s和（9.9±1.3）s分别比（13.9±1.8）s，（7.0±0.7）s和（8.7±1.2）s分别比（13.2±1.2）s，（7.1±0.9）s和（7.0±0.9）s分别比（13.2±1.4）s，P < 0.05]，给药后30 min、1 h和2 h 8p-CPT组TWL均明显高于NS组（9.2±1.0）s比（7.3±0.9）s，（9.9±1.3）s比（6.9±1.2）s，（8.7±1.2）s比（7.0±0.7）s，P < 0.05]。给药后1 h NS组和8p-CPT组脊髓背角c-Fos阳性细胞数明显高于C组，8p-CPT组脊髓背角c-Fos阳性细胞数明显低于NS组（75.25±8.42）个和（40.50±6.81）个分别比（25.25±5.25）个，（40.50±6.81）个比（75.25±8.42）个，P < 0.05]。结论 CFA诱导的慢性炎性痛可以降低脊髓背角Epac1蛋白含量、引起局部神经元异常激活、增强外周伤害性刺激应激反应。

The role of exchange protein directly activated by cyclic adenosine monophosphate in inflammatory pain of rats in spinal dorsal horn