| 人心肌营养素-1重组腺病毒载体的构建、纯化及表达 |
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| 引用本文： | 张正丰,廖维宏,杨青峰,李红运. 人心肌营养素-1重组腺病毒载体的构建、纯化及表达[J]. 第三军医大学学报, 2003, 25(17): 1531-1535 |
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| 作者姓名： | 张正丰 廖维宏 杨青峰 李红运 |
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| 作者单位： | 第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所第三研究室,重庆,400042 |
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| 基金项目： | 重庆市科委院士基金资助项目 ( 1999 0 0 3) |
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| 摘 要： | 目的 构建人心肌营养素 1重组腺病毒载体 ,以期用于神经系统退行性疾病及损伤的在体研究。方法 构建穿梭质粒pDC3 16 huCT1和pDC3 16 eGFP ,CsCl梯度离心制备高纯度的病毒基因组质粒pBHloxdeltaE1,3Cre、pHG14 0。培养2 93细胞 ,CaCl2 法质粒共转染 2 93细胞构建并筛选腺病毒AdCMV huCT1和AdCMV eGFP。病毒原液转染 2 93细胞及NIH3T3细胞 ,PCR、RT PCR及免疫组化鉴定。CsCl梯度离心纯化病毒 ,空斑试验检测病毒滴度。纯化病毒注入大鼠颈脊髓 ,RT PCR及免疫组化检验AdCMA huCT的在体表达。结果 采用双质粒共转染 2 93细胞Cre loxP位点同源重组方法构建了E1和E3缺失的含MCMV启动子、外源基因和SV40PloyA的AdCMV huCT1和AdCMV eGFP载体。经过PCR、RT PCR和免疫组化证实腺病毒载体构建成功。病毒经过CsCl梯度离心纯化后 ,AdCMV huCT1滴度达到 3 .0× 10 1 0 pfu。RT PCR及免疫组化显示AdCMV huCT1在大鼠脊髓中特异性表达。结论 构建并纯化了体外及体内高效表达的AdCMV huCT1。
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| 关 键 词： | 心肌营养素—1 重组腺病毒 基因治疗 |
| 文章编号： | 1000-5404(2003)17-1531-05 |
| 修稿时间： | 2002-10-14 |
Construction and purification of human cardiotrophin-1 adenovirus vector and its expression in vitro and in vivo |
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| ZHANG Zheng feng,LIAO Wei hong,YANG Qing feng,LI Hong yun. Construction and purification of human cardiotrophin-1 adenovirus vector and its expression in vitro and in vivo[J]. Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae, 2003, 25(17): 1531-1535 |
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| Authors: | ZHANG Zheng feng LIAO Wei hong YANG Qing feng LI Hong yun |
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| Keywords: | cardiotrophin 1 adenovirus gene therapy |
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