| 羊驼非免疫重链单域抗体库的构建和鉴定 |
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| 引用本文： | 吴标,王树军,夏立亮,季萍,葛海良,赵国屏,王颖. 羊驼非免疫重链单域抗体库的构建和鉴定[J]. 现代免疫学, 2011, 0(5) |
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| 作者姓名： | 吴标 王树军 夏立亮 季萍 葛海良 赵国屏 王颖 |
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| 作者单位： | 上海交通大学医学院上海市免疫学研究所;上海人类基因组研究中心上海市疾病与健康基因组重点实验室; |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划)(2006AA02A252); 卫生部“重大新药创制”科技重大专项(2011ZX09506-001); 上海市教委重点学科(J50207) |
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| 摘 要： | 本研究旨在通过构建羊驼非免疫重链单域抗体库,完成抗体库多样性的鉴定,为进一步筛选抗原特异性重链抗体奠定基础。我们从未经免疫的羊驼外周血中分离外周血单个核细胞(PBMC),抽提RNA后,用RT-PCR方法特异性扩增羊驼重链抗体可变区(VHH)片段;并采用两步连接方法将重链抗体可变区片段与噬菌粒载体pCANTAB5E连接获得重组子,多次电转感受态大肠杆菌TG1后获得VHH抗体基因库;并采用稀释计数法测定抗体库库容量,随机挑取克隆测序验证抗体库多样性。结果显示,我们所构建的羊驼非免疫重链单域抗体库的库容量为1.5×109,随机克隆测序验证多样性良好,独立克隆所占比例为80%,并显示出和人源抗体较高的同源性。上述结果表明,我们已经成功构建获得大容量的羊驼非免疫重链单域抗体库,为进一步筛选抗原特异性重链抗体奠定基础。
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| 关 键 词： | 重链单域抗体 非免疫抗体库 噬菌体展示 羊驼 |
Construction and characterization of a non-immune Llama variable heavy chain phage display antibody library |
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| WU Biao,WANG Shu-jun,XIA Li-liang,JI Ping,GE Hai-liang,ZHAO Guo-ping,WANG-Ying. Construction and characterization of a non-immune Llama variable heavy chain phage display antibody library[J]. Current Immunology, 2011, 0(5) |
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| Authors: | WU Biao WANG Shu-jun XIA Li-liang JI Ping GE Hai-liang ZHAO Guo-ping WANG-Ying |
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| Affiliation: | WU Biao1,WANG Shu-jun1,XIA Li-liang2,JI Ping1,GE Hai-liang1,ZHAO Guo-ping2,WANG-Ying1,2(1.Shanghai Institute of Immunology,Shanghai Jiaotong University School of Medicine,Shanghai 200025,China,2.Chinese National Human Genome Center at Shanghai,Shanghai Key Laboratory of Health and Disease Genomics,Shanghai 201203,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | heavy chain antibody non-immune VHH antibody library phage display Llama |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
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