COA: siRNA靶向PPARγ基因重组腺病毒穿梭载体对激素诱导兔骨髓间充质干细胞成脂分化的抑制作用

背景：激素是诱发股骨头坏死（osteonecrosis of the femoral head，ONFH)的重要原因之一，可导致骨细胞内脂肪沉积而变性坏死从而抑制成骨分化及骨的形成。过氧化物酶体增殖子活化受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ,PPARγ)是一种成脂转录因子，ONFH的发生与PPARγ在骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）的高表达有密切关系。BMSCs具有分化为成骨细胞与脂肪细胞的潜能，BMSCs内PPARγ高表达，则BMSCs分化为脂肪细胞。因此，通过RNA干扰（RNA interference，RNAi）调控PPARγ的表达可抑制BMSCs的脂肪分化，保持MSCs的成骨分化特性。方法：取新西兰大白兔骨髓，制备兔BMSCs，并随机分6组。S1、S2、S3：干扰1、2、3组，Con：感染无关siRNA组，M：模型组，N：正常组。10-7mol/L地塞米松诱导和siRNA病毒载体感染细胞，倒置显微镜观察BMSCs的形态及生长情况，在第1d、3d、5d、7d时，检测各组BMSCs内PPARγ、osteocalcin和Runx2 mRNA及蛋白的表达。14d时，检测细胞内甘油三酯( triglyceride，TG )含量、细胞培养液中骨钙素(osteocalcin，OC)分泌量和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)活性。21d，苏丹Ⅲ染色BMSCs，并在显微镜下作脂肪细胞计数。结果：M组和Con组中PPARγ mRNA及其蛋白表达、TG含量和脂肪细胞计数均明显高于N组(P <0.05)，而Osteocalcin和Runx2 mRNA及其蛋白表达、培养液中OC含量和细胞内ALP活性明显低于N组(P <0.05)。S1、S2、S3组中PPARγ mRNA及其蛋白表达显著低于M组和Con组(P <0.05)，接近N组 (P>0.05)，其中S2组的干扰作用最强。结论：siRNA靶向PPARγ基因腺病毒穿梭载体能够有效抑制激素诱导的BMSCs成脂分化，维持BMSCs成骨分化。