戊型肝炎病毒(HEV)开读框架2(ORF2)1.3kb基因片段在甲基营养型酵母(Pi |
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引用本文: | 张春江,沈心亮.戊型肝炎病毒(HEV)开读框架2(ORF2)1.3kb基因片段在甲基营养型酵母(Pi[J].生物制品年刊,1999(1):105-106. |
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作者姓名: | 张春江 沈心亮 |
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摘 要: | 戊型肝炎病毒(HEV)整个基因组有3个开放性阅读框架(ORFs),ORF2是主要结构基因编码区,将戊型肝炎病毒(HEV)ORF21.3kb基因定向亚克隆到甲基营养型酵母-巴斯德毕赤酵母(Pichia Pastoris)分泌性表达质粒pHIL-S1和pPIC9中,转化入大肠杆菌,筛选出阳性重组株,重组质粒pPIC9HEV和pHILS1HEV分别经限制性内切酶Sal I和Bg1 II线化,电转化入巴斯德毕赤酵母GS115。与宿主GS115染色体发生整合,整合方式不同,产生两种表型,分别为HIS+MUT+)甲醇诱导快的,HIS+MUTS(甲醇诱导慢的),通过营养缺陷性选择性培养基筛选出阳性菌株,经PCR技术确认外源基因整合在酵母染色体中,重组菌株先在甘油培养基中充分增殖,然后转移到甲醇培养基中诱导,取上清液,用ELIAA,SDS-PAGE,Western-blot检测到特异性HEVORF2蛋白,得到有效表达HEVORF2蛋白的菌株。
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关 键 词: | 戊型肝炎病毒 巴斯德毕赤酵母 表达载体 电转化 诱导表达 |
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