| 人心脏型脂肪酸结合蛋白的纯化与鉴定 |
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| 引用本文： | 季鹏,顾春荣,卞智萍,陈相健,张寄南,杨笛. 人心脏型脂肪酸结合蛋白的纯化与鉴定[J]. 中国组织工程研究与临床康复, 2007, 11(27): 5387-5390 |
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| 作者姓名： | 季鹏 顾春荣 卞智萍 陈相健 张寄南 杨笛 |
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| 作者单位： | 南京医科大学第一附属医院心血管病研究所,江苏省南京市,210029 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;江苏省政府135重点实验室科研基金 |
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| 摘 要： | 目的:以往的心脏型脂肪酸结合蛋白多来自牛、鼠等动物心肌组织,本实验构建了人左心室心肌组织纯化心脏型脂肪酸结合蛋白的新方法。方法:实验于2005-01/03在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所完成。①实验材料:人心室肌由南京医科大学第一附属医院心血管病研究所提供。②实验过程:取20g人左心室肌在缓冲液中匀浆,多步骤离心后以(NH4)2SO4进行盐析→再次离心→沉淀缓冲液重悬透析得蛋白粗提液→Sephadex G-75凝胶过滤→电泳确定主要蛋白条带的收集管号合并收集→QSepharose Fast Flow阴离子交换层析→聚乙二醇浓缩→缓冲液透析得人心脏型脂肪酸结合蛋白。③实验评估:以SIGMA公司人心脏型脂肪酸结合蛋白为对照标准品;以Tricine-SDS-PAGE电泳鉴定相对分子质量;以鼠抗人脂肪酸结合蛋白单克隆抗体及羊抗鼠IgG对其进行Western印迹检测鉴定其特异性。结果:①Sephadex G-75凝胶过滤柱层析结果:各组分经Tricine-SDS-PAGE电泳检测证实,部分收集管中存在相对分子质量约14400的人心脏型脂肪酸结合蛋白。②阴离子交换柱层析结果:在洗脱液NaCl浓度达6mmol/L时,出现蛋白峰,人心脏型脂肪酸结合蛋白被洗脱;NaCl浓度达20mmol/L时,蛋白峰降至基线,蛋白洗脱结束。③纯化的人心脏型脂肪酸结合蛋白鉴定结果:经电泳显示其相对分子质量约为14000,纯度约为90%;Western印迹证实其可被抗人脂肪酸结合蛋白单克隆抗体特异识别,与对照标准品SIGMA公司人心脏型脂肪酸结合蛋白结果一致。实验从20g湿重心室肌中共纯化得到15.4mg心脏型脂肪酸结合蛋白,得率为0.77mg/g。结论:Sephadex G-75凝胶过滤柱层析及阴离子交换柱层析相结合,可用于人心脏型脂肪酸结合蛋白的纯化。
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| 关 键 词： | 载体蛋白质类 人 分离和提纯 组织构建 |
| 文章编号： | 1673-8225（2007）27-05387-04 |
| 修稿时间： | 2007-04-09 |
Isolation and identification of heart-type fatty acid-binding protein from human myocardium |
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| Ji P,Gu CR,Bian ZP,Chen XJ,Zhang JN,Yang D. Isolation and identification of heart-type fatty acid-binding protein from human myocardium[J]. Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research, 2007, 11(27): 5387-5390 |
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| Authors: | Ji P Gu CR Bian ZP Chen XJ Zhang JN Yang D |
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| Affiliation: | Institute of Cardiovascular Disease, First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University, Nanjing 210029, Jiangsu Province, China |
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| Abstract: | |
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