巢式RT—PCR扩增Keration19诊断胃癌淋巴结微转移方法及应用

目的：建立ＲＴ－ＰＣＲ扩增Ｋｅｒａｔｉｎ１９ｍＲＮＡ的方法，评价其应用前景。方法：采用Ｋｅｒａｔｉｎ１９ｃＤＮＡ的套式引物建立巢式ＲＴ－ＰＣＲ扩增体系，以酶切分析及ＤＮＡ点杂交法鉴定扩增产物的特异性，逆转录产物系列稀释法分析检测敏感性，并对５１例临床胃周淋巴结样品作初步检测。结果：该扩增体系具有较好的扩增特异性，检测敏感性达１ｐｇＲＮＡ，相当于从１０＾５个淋巴细胞中检出１个胃癌细胞；对临床样品检测结果显示该法较病理检查法敏感性高。结论：该扩增体系具有较好的特异性、敏感性和较高的可靠性。