不同RNA提取及反转录方法对环状RNA聚合酶链反应的影响

［摘要］ 目的 比较不同总RNA提取方法及不同反转录引物对喉鳞状细胞癌细胞株Hep2细胞环状RAN扩增的影响，进一步为环状RNA鉴定与扩增提供可靠的实验方法。 方法 使用Trizol抽提法和miRNeasy Mini试剂盒提取Hep2细胞中的总RNA；Nanodrop 2000对总RNA进行定量及纯度测定；使用随机引物和通用引物分别对总RNA进步反转录；实时定量聚合酶链反应检测Hep2细胞中环状RNA-circHIPK3及circFLNA的表达。 结果 Trizol抽提法提取的RNA浓度和RNA总量高于miRNeasy Mini试剂盒提取的RNA总浓度结果（P＜0.01），但应用miRNeasy Mini试剂盒提取的RNA纯度要高于Trizol抽提法（P＜0.05），应用随机引物反转录，能扩增出circHIPK3和circFLNA，而利用通用引物进行反转录，circHIPK3及circFLNA不能被扩增；另外，利用miRNeasy Mini试剂盒法提取总RNA后所扩增出circHIPK3及circFLNA的相对表达量明显高于Trizol抽提法（P＜0.01）。 结论 miRNeasy Mini试剂盒提取总RNA纯度更高，更有利于环状RNA的扩增，利用随机引物进行反转录而非通用引物，可顺利扩增出环状RNA。