| 全长型人Smac基因真核表达载体构建及表达 |
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| 引用本文： | 郭彩霞,李艳博,刘晓梅,刘颖,杜海英,龚守良,孙志伟.全长型人Smac基因真核表达载体构建及表达[J].中国公共卫生,2008,24(11). |
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| 作者姓名： | 郭彩霞 李艳博 刘晓梅 刘颖 杜海英 龚守良 孙志伟 |
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| 作者单位： | 1. 吉林大学公共卫生学院卫生毒理学教研室,长春,130021
2. 吉林大学公共卫生学院卫生部放射生物学重点实验窒 |
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| 摘 要： | 目的 构建全长型(full length,FL)人Smac基因(hSmac)真核表达载体pcDNA3.1 -FL hSmac,并在肝癌细胞中表达.方法 应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从人宫颈癌细胞株Hela中扩增到Smac CDs基因片段,构建重组真核表达载体peDNA3.1 -FL hSmae.PCR、酶切鉴定重组质粒正确后,通过脂质体介导将其和作为阴性对照的空载体pcDNA3.1 分别转染人肝癌细胞株(SMMC-7721).同时转染含EGFP的质粒pcDNA3.1 -EGFP.利用荧光显微镜和流式细胞术检测转染效率.采用RT-PCR、western blot法检测外源基因Smac的表达.结果 PCR扩增片段与预期片段大小相符,插入片段测序结果与GenBank公布的一致,表明人Smac基因克隆成功.且鉴定证实真核表达载体pcDNA3.1 -FL hSmac构建成功.流式细胞术检测到转染效率高达48%,荧光显微镜下也可见非常明亮的绿色荧光.无论是在mRNA水平还是蛋白水平上,转染后的细胞中外源基因Smac表达均明显增加.结论 成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1 -FL hSmac,并在肝癌细胞中明显表达,为研究Smac基因在细胞凋亡过程中的调控作用.以及探讨以Smac基因为基础的肿瘤基因治疗策略提代基础依据.
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| 关 键 词： | 克隆 基因转染 |
Construction and expression of eukaryotic expression vector of full length human Smac gene |
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| GUO Cai-xia,LI Yan-bo,LIU Xiao-mei,et al..Construction and expression of eukaryotic expression vector of full length human Smac gene[J].Chinese Journal of Public Health,2008,24(11). |
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| Authors: | GUO Cai-xia LI Yan-bo LIU Xiao-mei |
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| Institution: | GUO Cai-xia,LI Yan-bo,LIU Xiao-mei,et al.Department of Toxicology,School of Public Health,Jilin University(Changchun 130021,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Smac |
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