| 可用体外翻译获得的可溶天然型EGFP的表达 |
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| 引用本文： | 黄学文,潘杰,安仙园,诸葛洪祥.可用体外翻译获得的可溶天然型EGFP的表达[J].检验医学,2007,22(2):146-149. |
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| 作者姓名： | 黄学文 潘杰 安仙园 诸葛洪祥 |
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| 作者单位： | 1. 苏州大学病原生物教研室,江苏,苏州,215123
2. 华东疗养院检验科,江苏,无锡,214065 |
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| 摘 要： | 目的构建能在体外大量表达可溶性天然型增强绿色荧光蛋白（EGFP）的pET28a—EGFP原核表达载体。方法以质粒pEGFP—N1为模板扩增EGFP基因，EcoRI和HindⅢ双酶切EGFP基因序列和pET28a载体。T4DNA连接酶连接，转化大肠埃希菌DH50t，提取载体，酶切和DNA测序鉴定。将pET28a—EGFP转化大肠埃希菌BL21（DE3），异丙基-B—D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导，观察荧光。体外翻译系统中加入重组pET28a—EGFP载体，孵育后观察荧光。免疫印迹法（Western blott）鉴定EGFP。结果测序证实pET28a—EGFP中的EGFP基因序列与GenBank中序列完全一致，荧光显微镜下观察到大肠埃希菌BL21（DE3）和体外翻译系统中强烈荧光，Westem blot结果显示相对分子质量约为27000的EGFP高效表达。结论成功构建了能在体内和体外稳定表达的可溶性天然型EGFP的pET28a—EGFP载体，为进一步体外筛选抑菌药物提供了可靠的报告载体。
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| 关 键 词： | 增强绿色荧光蛋白 pET28a载体 重组载体 体外翻译系统 原核表达 |
| 文章编号： | 1673-8640(2007)02-0146-04 |
| 修稿时间： | 2006年10月18 |
The prokaryotic expression of soluble native EGFP may be obtained by Cell-free translation system |
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| HUANG Xuewen,PAN Jie,AN Xianyuan,ZHUGE Hongxiang.The prokaryotic expression of soluble native EGFP may be obtained by Cell-free translation system[J].Laboratory Medicine,2007,22(2):146-149. |
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| Authors: | HUANG Xuewen PAN Jie AN Xianyuan ZHUGE Hongxiang |
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