CIP4对转化生长因子β1诱导的人肾小管上皮细胞-间充质转分化的影响 |
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引用本文: | 白寿军,张亚敏,曾锐,许楚瓯,刘丽丽,周巧丹,李彩霞,裴广畅,葛树旺,徐钢,刘晓城.CIP4对转化生长因子β1诱导的人肾小管上皮细胞-间充质转分化的影响[J].中华肾脏病杂志,2011,27(4):282-287. |
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作者姓名: | 白寿军 张亚敏 曾锐 许楚瓯 刘丽丽 周巧丹 李彩霞 裴广畅 葛树旺 徐钢 刘晓城 |
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作者单位: | DOI:10.3760/cma.j.issn.1001-7097.2011.04.013基金项目:国家自然科学基金(30871172,30971372);国家自然科学基金青年基金(30800525,30800383)作者单位:430030 武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院肾内科(白寿军,现在湖北医药学院附属太和医院肾内科) 通信作者:徐钢,Email:xugang@tjh.tjmu.edu.cn |
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基金项目: | 国家自然科学基金,国家自然科学基金青年基金 |
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摘 要: | 目的 观察骨架调节蛋白CIP4(Cdc42 interacting protein 4)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞-间充质转分化(EMT)的影响,并探讨其产生的机制。 方法 10 ?滋g/L TGF-β1刺激72 h诱导人近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞)向间充质转分化。Western印迹法检测各组细胞内E-cadherin和α-SMA蛋白的表达。倒置显微镜观察细胞形态的变化。根据GenBank人CIP4的完全cDNA序列,设计1条特异性干扰CIP4表达的RNA片段(CIP4-siRNA)和含野生型CIP4的重组真核表达质粒(pcDNA3.1-hCIP4),利用lipofactamine 2000将其转染HK-2细胞。Western 印迹法检测对照组、TGF-β1刺激组、CIP4-siRNA转染组、pcDNA3.1-CIP4转染组细胞内CIP4、E-cadherin和α-SMA蛋白的表达,共聚焦显微镜观察 E-cadherin和α-SMA蛋白的分布改变;用PI3K-Akt特异性抑制剂渥曼青霉素(wortmannin) 1 μmol/L干预TGF-β1刺激的HK-2细胞48 h,Western 印迹法检测对照组和干预组CIP4表达的变化。 结果 TGF-β1干预后HK-2细胞E-cadherin蛋白表达显著减少(P < 0.05),α-SMA蛋白表达显著增多(P < 0.05),细胞形态由典型的上皮细胞向肌成纤维细胞转变,表明TGF-β1诱导肾小管上皮细胞EMT模型成功。CIP4-siRNA抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞表达CIP4后,E-cadherin蛋白表达显著增多(P < 0.05),α-SMA蛋白表达显著减少(P < 0.05),部分逆转了上述TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞EMT。pcDNA3.1-hCIP4转染使CIP4高表达后,HK-2细胞E-cadherin蛋白表达显著减少(P < 0.05),α-SMA蛋白表达显著增多(P < 0.05),诱导了肾小管上皮细胞EMT。用渥曼青霉素干预TGF-β1刺激的HK-2细胞48 h,CIP4可能蛋白表达显著减少(P < 0.05)。 结论 TGF-β1通过PI3K-Akt途径上调CIP4表达,CIP4可能进一步参与TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞EMT过程。
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关 键 词: | 转化生长因子β1 肾小管 上皮细胞 上皮细胞-间充质转分化CIP4 PI3K-Akt |
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