抗人血管内皮生长因子发夹状核酶基因 真核表达载体的构建及其 对靶 mRNA的切割

肿瘤的生长和转移需要血管形成，现已发现有多种生物因子参与其形成过程。而血管内皮生长因子（ vascular endothelial growth factor, VEGF）被认为是最重要的血管生成因子之一，在肿瘤的生长与转移中起重要作用 1]。我们曾在卵巢癌中发现有 VEGF的高表达 2]，因此，我们自行设计和构建了针对 VEGF mRNA的发夹状核酶基因的真核表达载体，试图采用核酶（ ribozyme）技术抑制 VEGF的表达，以探讨卵巢癌基因治疗的新途径。 1 材料和方法 1． 1 菌种、质粒和试剂 大肠杆菌 DH5α、真核表达载体 pcDNA3由第四军医大学生化教研室提供。限制性内切酶及 T4 DNA连接酶等购自原平公司。 1． 2 抗人 VEGF核酶基因的合成 针对人 VEGF mRNA第三外显子，设计并合成抗人 VEGF发夹状核酶基因的两条互补单链。为便于克隆和鉴定，该基因的 5′端及 3′端分别设有 BamH I和 EcoR I酶切位点和两个保护碱基，共 66个碱基对。核酶基因两条链的序列为： V1， 5′ -CGG GAT CCC TGA TAA GAA TCC AAC CAG AGA AAC ACA CGT TGT GGT ATA TTA CCT GGT AGA ATC CCG-3′； V2， 5′ -CGG AAT TCT ACC AGG TAA TAT ACC ACA ACG TGT GTT TCT CTG GTT GGA TGT CTA TCA GGG ATC CCG-3′