细粒棘球蚴(中国大陆株)线粒体苹果酸脱氢酶重组蛋白的表达、纯化及免疫特性分析

目的 对细粒棘球蚴（中国大陆株）线粒体苹果酸脱氢酶（EgmMDH）重组质粒进行原核表达、纯化，并初步鉴定重组蛋白的免疫学特性。方法 对已构建的基因工程菌株mMDH／pGEM—T／JM109进行酶切，获取目的基因。将目的基因重组到pET28a表达载体上，筛选阳性表达菌株并进行诱导表达，经SDS—PAGE鉴定重组mMDH蛋白质为包涵体后，超声破碎细胞，尿素溶解包涵体，镍柱亲和层析法纯化，获取重组蛋白。以纯化的mMDH作抗原免疫小鼠，用Westernblot和ELISA方法检测重组蛋白的免疫原性及免疫鼠血清抗体水平。结果 成功构建原核重组表达载体mMDH／pET28a／BL21，并纯化出浓度较高的重组蛋白。ELISA结果显示，重组抗原免疫小鼠诱导产生了一定水平的血清抗体；Westernblot显示，原头蚴、囊液等天然抗原能被重组抗原免疫的小鼠血清识别。结论纯化后的重组蛋白mMDH具有较强的免疫原性，有望作为包虫病候选疫苗，值得进一步深入研究。

Expression, purification and immunogenicity analysis on mMDH recombinant protein of Echinococcus granulosus (Chinese mainland strain)