miR-16-5p通过调控PD-L1表达影响肝星状细胞炎症反应的研究

目的分析miR-16-5p在肝星状细胞中对程序性死亡受体-1（PD-1）表达的影响，并探讨其在肝纤维化及炎症反应中的作用机制。方法以大鼠肝星状细胞HSC-T6为研究对象，用5ng/ml转化生长因子β1（TGF-β1）处理细胞0、24、48、72h后，光镜下观察细胞形态，RT-qPCR法检测细胞TNF-α和IFN-γ表达水平，筛选出TGF-β1最佳作用时间。将细胞分为6组：对照组、模型组、miR-16-5p超表达组、miR-16-5p抑制组、超表达-空载组、抑制-空载组，采用RT-qPCR法检测miR-16-5p表达水平以验证转染效果；光镜下观察细胞形态变化；采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力；采用Westernblot法检测细胞PD-1配体（PD-L1）、NF-κB、p-NF-κB蛋白表达水平；采用RT-qPCR法检测细胞miR-16-5p、PD-L1以及炎症因子TNF-α、IFN-γ、IL-6和IL-10mRNA表达水平。结果5ng/mlTGF-β1处理细胞0、24、48、72h后，细胞增殖且形态发生改变；炎症因子TNF-α、IFN-γ在TGF-β1处理48h时后表达水平均明显增高（均P＜0.05）。与模型组相比，对照组和miR-16-5p超表达组细胞miR-16-5p的mRNA表达水平以及PD-L1和IL-10蛋白表达水平均明显升高（均P＜0.05），p-NF-κB/NF-κB的蛋白表达水平以及TNF-α、IFN-γ和IL-6的mRNA表达水平均降低（均P＜0.05），miR-16-5p超表达组细胞增殖能力降低（P＜0.05）；miR-16-5p抑制组miR-16-5p、PD-L1、IL-10的mRNA表达水平均降低（均P＜0.05），p-NF-κB/NF-κB的蛋白表达水平以及TNF-α、IFN-γ、IL-6的mRNA表达水平均升高（均P＜0.05），细胞增殖能力增强（P＜0.05）。结论miR-16-5p在肝星状细胞中通过调控PD-L1表达降低肝细胞炎症水平，抑制细胞增殖，其机制可能参与抑制肝纤维化发生。