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| 重组抗HER2融合蛋白基因ScFv/tBid对骨肉瘤E10细胞的促凋亡作用 | |
| 引用本文： | 裘秀春,单乐群,纪振钢,杨彤涛,龙华,许彦鸣,周勇,马保安,杨安钢,范清宇. 重组抗HER2融合蛋白基因ScFv/tBid对骨肉瘤E10细胞的促凋亡作用[J]. 中国肿瘤生物治疗杂志, 2008, 15(2): 105-109. DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2008.02.002 |
| 作者姓名： | 裘秀春 单乐群 纪振钢 杨彤涛 龙华 许彦鸣 周勇 马保安 杨安钢 范清宇 |
| 作者单位： | 1. 唐都医院,骨科,西安,710038 2. 唐都医院,基础部,生物化学与分子生物学教研室 3. 唐都医院,基础部,免疫学教研室,西安,710038 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金 , 国家自然科学基金 , 国家自然科学基金 , 中国博士后科学基金 |
| 摘 要： | 目的：构建抗HER2重组融合蛋白基因ScFv/tBid,并探讨其对骨肉瘤E10细胞的促调亡作用。方法：通过间接免疫荧光染色、流式细胞仪（FCM）检测E10细胞膜表面HER2的表达。将抗HER2单链抗体基因e23sFv与铜绿假单胞菌外毒素PE的转膜结构域基因（PEⅡ）和tBid基因连接,构建抗HER2重组融合蛋白基因ScFv/tBid,将其克隆入真核表达载体pCMV中构建重组pCMV-ScFv/tBid载体,转染骨肉瘤E10细胞。间接免疫荧光法检测目的蛋白表达和细胞形态学变化,Annexin V染色流式细胞术及TUNEL法检测E10细胞的凋亡情况。结果：流式细胞仪检测到E10细胞膜表面有HER2的表达。成功构建重组融合蛋白基因质粒pCMV-ScFv/tBid。重组质粒转染E10细胞后,间接免疫荧光双标记染色检测到E10细胞中tBid的过表达;细胞色素C在细胞质中出现;细胞出现明显的固缩、核浓缩等形态特征。Annexin V染色后流式细胞仪检测可见实验组细胞凋亡率较对照组明显升高（16.1% vs 4.5%）;TUNEL染色显示,E10细胞出现典型的凋亡特征。结论：重组抗HER2融合蛋白基因ScFv/tBid可以在转染的骨肉瘤E10细胞中表达,并诱导骨肉瘤细胞发生凋亡。 |
| 关 键 词： | tBid 人表皮生长因子受体2 融合蛋白 骨肉瘤细胞 细胞凋亡 重组融合蛋白 融合蛋白基因 ScFv tBid 骨肉瘤 细胞发生 促凋亡作用 fusion protein recombinant effect cells osteosarcoma 形态特征 染色显示 对照组 细胞凋亡率 实验组 细胞质 细胞色素 染色检测 |
| 文章编号： | 1007-385X(2008)02-0105-05 |
| 收稿时间： | 2008-05-06 |
| 修稿时间： | 2007-11-08 |
Pro apoptotic effect of recombinant anti HER2 fusion protein ScFv/tBid gene on osteosarcoma E10 cells |
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| QIU Xiu-chun,SHAN Le-qun,JI Zhen-gang,YANG Tong-tao,LONG Hu,XU Yan-ming,ZHOU Yong,MA Bao-an,YANG An-gang and FAN Qing-yu. Pro apoptotic effect of recombinant anti HER2 fusion protein ScFv/tBid gene on osteosarcoma E10 cells[J]. Chinses Journal of Cancer Biotherapy, 2008, 15(2): 105-109. DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2008.02.002 | |
| Authors: | QIU Xiu-chun SHAN Le-qun JI Zhen-gang YANG Tong-tao LONG Hu XU Yan-ming ZHOU Yong MA Bao-an YANG An-gang FAN Qing-yu |
| Abstract: | |
| Keywords: | BH3 interacting death agonist ( tBid ) human epidermal growth factor receptor 2(HER2) fusion protein osteosarcoma cell apoptosis |
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