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| HIV-gp120人源单链可变区抗体筛选与鉴定 | |
| 引用本文： | 贾雷立,马巍娜,宋宏彬,钟彦伟,刘雪林,戚红卷,张传福,徐元勇,高志贤. HIV-gp120人源单链可变区抗体筛选与鉴定[J]. 中国公共卫生, 2009, 25(2) |
| 作者姓名： | 贾雷立 马巍娜 宋宏彬 钟彦伟 刘雪林 戚红卷 张传福 徐元勇 高志贤 |
| 作者单位： | 1. 中国人民解放军疾病预防控制所,北京,100071 2. 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心 3. 军事医学科学院卫生环境医学研究所 |
| 基金项目： | 国家科技支撑计划基金 |
| 摘 要： | 目的 通过制备抗人类免疫缺陷病毒(HIV)gp120蛋白人源单链可变区抗体(seFv),探索新型抗人获得性免疫缺陷病毒(HIV)治疗方法.方法 采用噬菌体表面展示技术,将HIV-gp120蛋白固相包被于Nunc板,应用半合成的人源单链可变区抗体文库技术,从噬菌体单链可变区抗体库中经过5轮吸附-洗脱-扩增筛选过程,随机挑选96个克隆,利用酶联免疫吸附法(ELISA)、交叉反应和竞争抑制实验,进行免疫学检测和鉴定,获得与HIV-gp120蛋白结合活性较强的scFv阳性克隆,并对HIV-gp120蛋白ScFv的编码基因进行序列测定分析.结果 经过筛选96个克隆中有39株克隆ELISA的吸光度(A450 nm)值较高,将这些噬菌体上清与牛血清白蛋白(BSA)进行交叉反应,确定其中有7株交叉反应较弱,结合3次ELISA重复实验的A值及竞争抑制实验结果,最后确定1株阳性克隆.提取质粒,进行DNA序列测定,DNA为699 bp.结论 用噬菌体抗体库技术成功地获得抗HIV-gp120蛋白的scFv,为抗gp120蛋白的ScFv防治艾滋病研究创造了条件. |
| 关 键 词： | 人类免疫缺陷病毒(HIV) 单键可变区抗体(ScFv) |
Screening and identification of antibody single chain variable fragment against HIV gp120 |
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| Abstract: | |
| Keywords: | gp120 |
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