| 切除GST标签的重组蛋氨酸酶及多抗制备 |
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| 引用本文： | 张芳,任晓丽,罗得华,罗沈强,王文举,张华堂,田长富.切除GST标签的重组蛋氨酸酶及多抗制备[J].昆明医学院学报,2013,34(3):8-11. |
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| 作者姓名： | 张芳 任晓丽 罗得华 罗沈强 王文举 张华堂 田长富 |
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| 作者单位： | 张芳 (昆明医科大学生物医学工程研究中心,基因与蛋白质工程研究室,云南昆明 650500)；任晓丽 (昆明医科大学生物医学工程研究中心,基因与蛋白质工程研究室,云南昆明 650500)；罗得华 (昆明医科大学生物医学工程研究中心,基因与蛋白质工程研究室,云南昆明 650500)；罗沈强 (昆明医科大学生物医学工程研究中心,基因与蛋白质工程研究室,云南昆明 650500)；王文举 (中国科学院昆明动物研究所,云南昆明,650223)； 张华堂 (中国科学院昆明动物研究所,云南昆明,650223)；田长富 (昆明医科大学生物医学工程研究中心,基因与蛋白质工程研究室,云南昆明 650500)； |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(项目编号：30760287),云南省科技厅自然科学基金资助项目(项目编号：2009CC022) |
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| 摘 要： | 目的优化表达条件后纯化出切除GST标签的Met-PGEX-4T-1蛋白,制备出假单胞菌来源的多克隆抗体.方法将蛋氨酸酶(L-methionine gamma-lyase,Me)t的基因克隆至pBSK载体中,形成重组质粒pBSK-Met,采用基因工程技术将pBSK-Met与PGEX-4T-1载体连接,形成Met-PGEX.利用大肠杆菌表达系统诱导表达出Met-PGEX,采用亲和层析法过柱纯化Met-PGEX,凝血酶切除分子量为26KD的GST标签,免疫新西兰兔制备出蛋氨酸酶多克隆抗体Met PcAb,双向免疫扩散实验测多克隆抗体效价为1:128,间接Elisa法测效价1:1×105.结果成功表达纯化出纯度大于90%的Met-PGEX并制备出多克隆抗体.结论所制备的多克隆抗体可用于检测不同来源重组蛋氨酸酶抗原差异性变化.
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| 关 键 词： | 蛋氨酸酶GST标签 多抗制备 |
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