| X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1启动子的克隆及其转录活性检测 |
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| 引用本文： | 罗晓勇,张积仁,王继德. X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1启动子的克隆及其转录活性检测[J]. 中国临床康复, 2008, 12(8): 1505-1508 |
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| 作者姓名： | 罗晓勇 张积仁 王继德 |
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| 作者单位： | [1]南方医科大学珠江医院肿瘤中心,广东省广州市510282 [2]南方医科大学南方医院消化科,广东省广州市510515 |
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| 摘 要： | 目的：X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1能够诱导半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3凋亡，其具体转录调控机制尚不十分清楚。克隆X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1基因启动子，检测干扰素对其转录活性的影响。方法：实验于2006—05／2007—07在香港大学分子生物学研究所和洛阳华美生物工程公司完成。①材料：结肠癌细胞株Lovo和Swl116来自美国American Type Culture Col-lection。pGL3 basic载体，内参照pRL-CMV载体和Dual-luciferase reporter Kit，T4DNA连接酶，限制性内切酶KpnI和XhoI均由Promega公司提供。②实验方法：采用PCR法扩增获得X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1基因的启动子片段，将之定向克隆到含荧光素酶报告基因的pGL3 basic载体上，获得的报告基因质粒命名为pLUC107，瞬时转染Lovo和Swl116细胞株，经α-干扰素刺激处理，启动子转录活性用荧光素酶相对表达活性表示。结果：①PCR扩增结果：在预期的271bp处出现清晰DNA片段，无非特异扩增现象，证明其为X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1启动子的PCR扩增产物。②重组质粒的酶切鉴定及测序：重组质粒pLUC107双酶切后可见约为271bp的DNA片段，与理论值相一致。DNA测序证实含X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1启动子荧光素酶报告基因质粒构建成功。③干扰素对X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1启动子转录活性的影响：与未经α-干扰素处理的含pLUC107的Lovo和Swl116细胞的荧光素酶相对活性值比较，经α-干扰素处理后两种细胞的荧光素酶相对活性值均明显升高（P均〈0．05），且升高幅度与α-干扰紊呈剂量依赖性。结论：成功克隆出X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1基因启动子片段，并利用荧光素酶报告基因证实α-干扰素可上调其转录活性。
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| 关 键 词： | X-染色体相关凋亡抑制蛋白相关因子1 启动子 荧光素酶报告基因 |
| 文章编号： | 1673-8225（2008）08-01505-04 |
| 收稿时间： | 2007-09-18 |
| 修稿时间： | 2007-12-28 |
Promoter cloning for X-chromosome linked inhibitor of apoptosis associated factor 1 and identification of its transcriptional activities |
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| Luo Xiao-yong, Zhang Ji-ren, Wang Ji-de. Promoter cloning for X-chromosome linked inhibitor of apoptosis associated factor 1 and identification of its transcriptional activities[J]. Chinese Journal of Clinical Rehabilitation, 2008, 12(8): 1505-1508 |
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| Authors: | Luo Xiao-yong Zhang Ji-ren Wang Ji-de |
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| Affiliation: | Luo Xiao-yong, Zhang Ji-ren, Wang Ji-de (1.Oncology Center, Zhujiang Hospital, Southern Medical University, Guangzhou 510282, Guangdong Province, China; 2.Department of Digestive Diseases, Nanfang Hospital, Southern Medical University, Guangzhou 510515, Guangdong Province, China) |
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