中国主要问号钩端螺旋体血清群外膜蛋白OmpL1的基因型,原核表达系统构建表达及免疫学鉴定

目的 探讨15群15型问号钩端螺旋体(简称钩体)中国参考标准株及2群2型双曲钩体国际参考标准株是否均存在外膜蛋白OmpL1基因，克隆并构建该基因的原核表达系统，鉴定表达产物的免疫性。方法 常规酚．氯仿法提取上述钩体的基因组DNA，高保真PCR扩增全长OmpL1基因片段,T-A克隆后测定核苷酸序列并构建原核表达系统，不同浓度lPTG诱导后用SDS-PAGE检测重组蛋白rOMPLI表达情况。分别用兔抗钩体TR／PatocⅠ抗原、rOMPL1血清的Westernblot鉴定其免疫反应性和免疫原性。分别用显微镜凝集试验(MAT)和钩体细胞黏附模型检测兔抗rOMPLI血清的交叉凝集效价和细胞黏附阻断作用。结果 上述17株钩体均具有OmpL1基因，但至少可分3种基因型：OmpL1/1、OmpL1/2和OmpL1/3。与文献报道比较，所克隆的OmpL1/1、OmpL1/2和OmpL1／3基因核苷酸序列同源性分别为93．87％～94．08％、89．82％～100％和80．89％～81．72％，其氨基酸序列同源性分别为93．13％～98．75％、91．87％～100％和85．63％～88．44％。IPTG诱导后pET32a-OmpL1/1．E．coli／BL21DE3和pET32a-OmpL1/2-E．coliBL21DE3的rOMPL1/1和rOMPL1/2表达量分别占细菌总蛋白的30％和20％。rOMPL1，1和rOMPLl，2均能与兔抗钩体TR／PatocⅠ抗原血清发生免疫结合反应，免疫家兔可获得抗体。兔抗rOMPL1/1和rOMPL1/2血清对上述17株钩体的MAT效价为1：2．1：32，1：2．1：16稀释时均能有效地阻断钩体黏附J744A．1细胞。结论 所检测的钩体均有OmpLl基因，但至少可分为3种不同的基因型。所构建的原核表达系统表达的rOMPL1/1和rOMPL1/2具有良好的免疫原性和免疫反应性。rOMPL1/1和rOMPL1/2具有属特异性、钩体表面的膜蛋白抗原，能诱生交叉凝集抗体，并具有钩体黏附阻断的作用。

Genotypes of the OmpL1 gene from the dominant serogroups of Leptospira interrogans in China and construction of prokaryotic expression system of the gene and immunological identification of the recombinant protein