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碱性成纤维细胞生长因子真核表达载体的构建及其在内耳基因治疗中的实验研究
作者姓名:时利 董明敏 等
作者单位:解放军总医院耳鼻咽喉科研究所,北京100853
摘    要:目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)双顺反子真核表达载体在豚鼠耳蜗中的表达,及噪声损伤后对毛细胞的保护作用。方法:利用脑炎心肌炎病毒的内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES),构建人bFGF与增强型绿色荧光蛋白(enhance green fluorescence protein,EGFP)基因真核表达载体pIRES-bFGF-EGFP。采用硬脂胺(stearylamine,SA)脂质体介导bFGF基因转染豚鼠内耳,噪声暴露即刻通过圆窗向豚鼠耳蜗注入含有bFGF基因作为治疗基因的真核表达载体;或在噪声暴露前7d,为保护因子转导转染豚鼠耳蜗。结果:构建的pIRES-bFGF-EGFP在转染24h后开始表达,48h达到最高,表达时间可持续1人月。治疗组在噪声后听性脑干反应平均阈值均低于噪声组,在保护组:pIRES-bFGF-EGFP对耳蜗毛细胞有明显的保护作用。结论:本研究成功地构建了pIRES-bEGF-EGFP真核共表达载体,具有bFGF、EGFP的双重活性,IRES可引导外源基因bFGF在内耳毛细胞表达。

关 键 词:碱性成纤维细胞生长因子 真核表达 载体构建 基因治疗 实验研究 内耳疾病 治疗
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