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肺泡Ⅱ型上皮细胞原代培养及高体积分数氧-停氧对其细胞内钙离子水平的影响
引用本文:刘秀香,巨容,杨志军,尹晓娟,封志纯. 肺泡Ⅱ型上皮细胞原代培养及高体积分数氧-停氧对其细胞内钙离子水平的影响[J]. 实用儿科临床杂志, 2008, 23(6): 418-420
作者姓名:刘秀香  巨容  杨志军  尹晓娟  封志纯
作者单位:1. 南方医科大学附属珠江医院儿科,广州,510282
2. 北京军区总医院附属八一儿童医院新生儿科,北京,100700
基金项目:国家自然科学基金项目资助(30772036)
摘    要:目的 原代培养肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ),并动态观察高体积分数氧(高氧)-停氧对其细胞内钙离子([Ca2 ]I)的影响,为体外研究AECⅡ及阐明高氧肺损伤发病机制提供实验基础.方法 孕19 d SD大鼠麻醉消毒后超净台内剖腹取出所有胎鼠.用胎鼠肺组织进行AECⅡ分离、纯化及原代培养,倒置相差显微镜下观察其细胞的形态及生长状况.通过激光共聚焦显微镜观察其肺表面活性蛋白C(SP-C)免疫荧光的阳性表达鉴定AEC Ⅱ.鉴定为AECⅡ的细胞通以高氧(氧流量为3 mL/min,测氧仪检测氧体积分数为930~970 mL/L),持续约5 min后立即停氧,用激光共聚焦显微镜动态观察[ca2 ]I的变化情况,记录其随时间改变的动态变化曲线,同时观察钙离子荧光强度的变化并连续拍摄照片.结果 例置相差显微镜观察AEC Ⅱ呈岛状分布,铺路石状,细胞核及核仁明显,胞核圆形,胞浆内较多颗粒.激光共聚焦显微镜下可见AECⅡ胞浆中呈现绿色荧光的SP-C阳性表达.予AECⅡ高氧刺激时,[Ca2 ]I出现短暂下降后持续上升,上升至一定程度后又缓慢下降,甚至出现[Ca2 ]I耗竭现象,并维持该水平.予停氧刺激,[Ca2 ]I出现短暂下降后迅速上升,然后逐渐趋于平稳.随着[Ca2 ]I水平的增减,Ca2 荧光强度相应的增强或减弱.结论 高氧及给氧后停氧均可使[Ca2 ]I产生明显变化,可能是高氧导致AECⅡ损伤的重要途径之一.

关 键 词:高体积分数氧  肺泡Ⅱ型上皮细胞  钙离子  激光共聚焦显微镜  肺泡Ⅱ型上皮  细胞原代培养  高体积分数  细胞内钙  离子水平  影响  Epithelial Cell  Alveolar  Culture  Primary  Cytosolic Calcium  Oxygen  损伤  给氧  增强  现象  耗竭  程度  刺激  阳性表达
文章编号:1003-515X(2008)06-0418-03
修稿时间:2008-01-20

Primary Culture of Alveolar Epithelial Cell Ⅱ and Effect of Hyperxia and then Stopped Oxygen on Cytosolic Calcium
LIU Xiu-xiang,JU Rong,YANG Zhi-jun,YIN Xiao-juan,FENG Zhi-chun. Primary Culture of Alveolar Epithelial Cell Ⅱ and Effect of Hyperxia and then Stopped Oxygen on Cytosolic Calcium[J]. Journal of Applied Clinical Pediatrics, 2008, 23(6): 418-420
Authors:LIU Xiu-xiang  JU Rong  YANG Zhi-jun  YIN Xiao-juan  FENG Zhi-chun
Abstract:
Keywords:
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