检测5种碳青霉烯酶基因的多重PCR方法的建立及临床应用

目的建立并评价一种多重降落PCR(Multiplex Touchdown PCR,MT-PCR)方法检测5种碳青霉烯酶基因。方法收集东部战区总医院保存的42株耐碳青霉烯类菌株和合成的带有OXA-48部分基因质粒,建立5种碳青霉烯酶基因的多重降落PCR方法,分析其特异性、敏感性,并收集东部战区总医院临床微生物实验室送检的临床无菌体液标本67份及其分离菌株36株进行临床应用评价。结果 MT-PCR可用于5种碳青霉烯酶基因的检测,对blaOXA-48、blaVIM和blaKPC检测限均为200 CFU/ml,而对blaIMP与blaNDM的检测限为2×10~3 CFU/ml。42株临床分离菌株的MT-PCR检测结果与单重PCR检测结果完全一致。以抗菌药物药敏试验为参考方法,67个无菌体液标本的MT-PCR结果与药敏试验结果差异无统计学意义(P=0.125),且敏感性和特异性分别为80.00%和100.00%。结论 MT-PCR方法能有效地用于临床分离物和无菌体液标本中的碳青霉烯酶基因检测。