| 摘 要： | 目的表达重组结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)Rv0033,并观察其免疫原性,为结核病(Tuberculosis, TB)新型疫苗的研发筛选优势靶抗原。方法构建重组载体pET30b-Rv0033并表达重组Rv0033。以全血干扰素释放技术(Whole blood IFN-γrelease assay, WBIA)检测M.tb感染者的T细胞是否特异性识别重组载体pET30b-Rv0033。取纯化的rRv0033混合佐剂DMT后免疫小鼠,ELISA法检测血清特异性抗体IgG、IgG1及IgG2a水平,并计算IgG2a/IgG1比值;同时检测小鼠脾细胞中特异性IFN-γ、TNF-α、IL-2水平。结果成功构建原核表达载体pET30b-Rv0033,重组Rv0033的诱导表达、纯化和鉴定结果均符合预期。人群外周血淋巴细胞经rRv0033蛋白刺激后,非典型结核(Atypical tuberculosis, ATB)及潜伏性结核感染(Latent tuberculosis infection, LTBI)受试者IFN-γ水平显著高于健康对照人群(P0.01);ATB受试者IFN-γ水平显著高于LTBI受试者(P0.05)。BCG+Rv0033/DMT免疫小鼠产生的特异性抗体(IgG、IgG1和IgG2a)滴度水平显著高于Rv0033/DMT组和BCG组(均P0.01);Rv0033/DMT组和BCG+Rv0033/DMT组小鼠的IgG2a/IgG1比值显著高于DMT组和BCG组,且1,提示rRv0033可诱导以Th1细胞免疫应答为主的免疫应答。接受PPD刺激或rRv0033蛋白刺激的BCG+Rv0033/DMT组小鼠IFN-γ、TNF-α及IL-2水平较高,其次分别是BCG组、Rv0033/DMT组、DMT组,PBS组水平较低,且rRv0033蛋白混合DMT佐剂组高于单纯DMT佐剂组(P0.05)。结论制备的rRv0033蛋白可被M.tb感染者外周血T细胞特异性识别,联合佐剂DMT免疫小鼠能够诱导高水平的抗原特异性Th1型免疫应答,可能与rRv0033蛋白提供的免疫保护力密切相关。
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