σ因子在四种结核分枝杆菌临床株中的表达分析

目的 探索在体外培养的环境下,结核分枝杆菌13种σ因子在临床分离的敏感菌株、单耐异烟肼(INH)、单耐利福平(RFP))、耐多药(同时耐INH和RFP)菌株中的表达情况。方法 选取2018年1—12月天津市结核病控制中心门诊部确诊的结核病患者,对其痰标本快培阳性的实验菌株进行比例法药敏实验,随机分别选择10株全敏菌株、单耐异烟肼、单耐利福平、同时耐利福平和异烟肼的菌株进行Hain实验,随机分别选择10株katG 突变的单耐异烟肼菌株、rpoB 突变的单耐利福平菌株、katG 和rpoB 同时突变的耐多药临床分离株。以传统的Trizol方法提取全菌RNA,设计σ因子的特异性引物,以荧光定量PCR的方法,检测σ因子在转录水平上RNA的表达情况。以核糖体16s为参照基因,利用2^-ΔCt分析σ因子的转录倍数。将稳定表达的sigA作为统计分析的底物,单因素方差(ANOVA)分析其余σ因子的表达差异。结果 σ因子在四种临床分离株中的表达情况与H37Rv相比,虽然所有的σ因子转录水平都提高,但是差异无统计学意义(P >0.05)。三种耐药表型菌株和敏感菌相比,σ因子表达量也都上调,在单耐异烟肼的菌株中,sigC、sigG、sigI、sigJ、sigK表达倍数最高,单因素方差分析差异有统计学意义(P <0.05)。在单耐利福平表型中,只有sigC、sigG表达倍数最高,但差异无统计学意义(P >0.05)。在耐多药菌株中,sigC表达倍数最高,表达倍数>10(P <0.05)。结论 耐药基因的突变能够上调σ 因子的转录水平,σ 因子中sigB、sigC、sigG、sigI、sigJ、sigK可能会成为研究耐药新药方面的新的靶标。

Differential expression analysis of σ factors in four clinical isolated strains of Mycobacterium tuberculosis