| 人野生型survivin-1基因重组载体的构建及其在A549中的表达 |
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| 引用本文： | 刘彦兵,李简,刘桐林. 人野生型survivin-1基因重组载体的构建及其在A549中的表达[J]. 中国现代医学杂志, 2007, 17(6): 683-685 |
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| 作者姓名： | 刘彦兵 李简 刘桐林 |
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| 作者单位： | 北京大学第一医院,胸外科,北京,100034 |
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| 摘 要： | 目的克隆细胞凋亡抑制蛋白Survivin异构体之一Survivin-1（SVV-1）基因的编码序列，构建含SVV-1基因的真核细胞表达载体并在肺腺癌细胞系A549中高表达，为进一步研究该基因在肺腺癌发病中的作用奠定基础。方法根据已发表的SVV-1基因的核苷酸序列自行设计一对分别合有BamHⅠ和XhoⅠ双酶切住点的survivin-1基因上下游引物，以A549细胞系抽提的R．NA为模板进行逆转录聚合酶链反应（RT—PCR），扩增产物用BarnHⅠ和XhoⅠ双酶酶切后定向克隆到真核细胞表达载体pcDNA3．0中，用限制性内切酶酶切重组质粒pcDNA30-SVV-1和DNA序列测定进行鉴定。用脂质体法将pcDNA3.0—SVV-1导入肺腺癌细胞系A549中，嘌呤霉素选择培养，经免疫组化法和western blot鉴定其表达。结果RT—PCR扩增出长448bp的特异性片段，经克隆至pcDNA3．0后酶切鉴定证实，并测序表明序列与Gen—Bank报道完全一致。pcDNA3．0—SVV-1在A549细胞中有稳定表达。结论成功克隆了SVV-1的编码序列，构建了其真核细胞表达载体pcDNA3．0-SVV-1，有助于对SVV-1基因在腺癌发生中的致瘤机制做进一步研究。
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| 关 键 词： | Survivin-1基因 基因克隆 真核表达载体 肺腺癌A549 |
| 文章编号： | 1005-8982（2007）06-0683-03 |
| 收稿时间： | 2006-09-21 |
| 修稿时间： | 2006-09-21 |
Construction of recombinant plasmid vector containing human survivin-1 gene and expression in lung adenocarcinoma A549 cells |
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| LIU Yan-bing,LI Jian,LIU Tong-lin. Construction of recombinant plasmid vector containing human survivin-1 gene and expression in lung adenocarcinoma A549 cells[J]. China Journal of Modern Medicine, 2007, 17(6): 683-685 |
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| Authors: | LIU Yan-bing LI Jian LIU Tong-lin |
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| Affiliation: | Department of Thoracic, the First Hospital, Beijing University, Beijing 100034, P.R.China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | adenocarcinoma A549 cells plasmid vector, survivin-1 gene clone |
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