负载ERRα基因片段慢病毒构建及表达 |
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引用本文: | 王海彬, 周驰, 刘锋, 曾展鹏. 负载ERRα基因片段慢病毒构建及表达[J]. 中国公共卫生, 2012, 28(9): 1194-1197. DOI: 10.11847/zgggws2012-28-09-19 |
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作者姓名: | 王海彬 周驰 刘锋 曾展鹏 |
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作者单位: | 1.广州中医药大学第一附属医院关节中心, 广东 广州 510405 |
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基金项目: | 国家自然科学基金,广东省自然科学基金,广东省中医药管理局基金 |
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摘 要: | 目的 构建编码人雌激素相关受体α(hERRα)的慢病毒载体,并测定其滴度,观察hERRα基因在体外的表达情况及其对人肺癌细胞A549增殖的影响。方法 采用PCR扩增hERRα基因片段,插入转移载体pW-PXLD,用磷酸钙法将pWPXLD-hERRα、psPAX2和pMD2.G共转染293T细胞包装慢病毒,浓缩后测定病毒滴度,再将病毒感染A549细胞,用蛋白印迹方法测定感染病毒的A549细胞中hERRα的表达。选择合适滴度的病毒感染A549细胞,采用cell-titer的方法检测感染病毒的A549细胞的活力。结果 测序结果显示成功构建了重组质粒pWPXLD-hERRα,测定浓缩后的病毒滴度为1.8×108TU/mL,蛋白印迹方法检测到慢病毒感染的A549细胞中hERRα呈阳性表达;cell-titer glo检测结果表明过表达hERRα能促进细胞增殖。结论 成功构建了负载hERR基因片段的慢病毒,hERRα能在感染的A549细胞中高效表达,并促进感染病毒的A549细胞增殖。
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关 键 词: | 人雌激素相关受体(hERR) 慢病毒载体 细胞增殖 |
收稿时间: | 2011-10-11 |
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