恶性疟虫肝期抗原1基因3′端的克隆及序列分析

目的：克隆并测定恶性疟原虫海南株（FCC1／HN）肝期抗原1基因（LSA－1）3′端序列，比较FCC1／HN株与国外分离株LSA－1，3′端序列的差异。方法：应用PCR技术从FCC1／HN株基因组DNA中扩增LSA－1，3′端序列，用T－A克隆法将其克隆入pMD18－5载体。阳性克隆的重组质粒经酶切及PCR扩增鉴定后，用双脱氧链末端终止法进行基因序列测定。应用DNASTAR软件进行不同分离株LSA－1，3′端序列的同源性分析。结果：PCR扩增得到特异的FCC1／HN LSA－1，3′端序列。酶切及PCR鉴定获得了正确的pT－LSA－1重组质粒。测序表明，所克隆的LSA－1，3′端大小为795bp，编码264个氨基酸。序列分析表明，我国恶性疟原虫FCC1／HN株国外的NF54、T9／96、KEN、PNG及BRA株LSA－1，3′端编码的氨基酸序列只在3个位点存在不同。结论：克隆了恶性疟原虫FCC1／HN LSA－1，3′端片段。序列测定及同源性分析表明，FCC1／HNLSA－1，3′端序列与其它分离株有高度的同源性。