| 人miR-152基因的慢病毒载体的构建及稳定株筛选 |
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| 引用本文： | 冯跃英,许晓琴,林胡,史春梅,季晨博,郭锡熔,傅君芬.人miR-152基因的慢病毒载体的构建及稳定株筛选[J].临床检验杂志,2013,31(1):20-23. |
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| 作者姓名： | 冯跃英 许晓琴 林胡 史春梅 季晨博 郭锡熔 傅君芬 |
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| 作者单位： | 浙江大学附属儿童医院内分泌科，杭州310003;浙江大学附属儿童医院内分泌科，杭州310003;浙江大学附属儿童医院内分泌科，杭州310003;南京医科大学附属南京妇幼保健院儿童保健科，南京210004;南京医科大学附属南京妇幼保健院儿童保健科，南京210004;南京医科大学附属南京妇幼保健院儿童保健科，南京210004;浙江大学附属儿童医院内分泌科，杭州310003 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（81270938）;创新研究群体科学基金。 |
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| 摘 要： | 目的构建人miR-152基因重组慢病毒载体并筛选稳定表达株。方法 PCR扩增包括miR-152前体所在区域的基因组DNA,克隆到慢病毒载体表达质粒pGIPZ中,得到重组的pGIPZ-miR-152表达载体,通过与包装质粒共转染HEK-293T细胞,获得携带miR-152 minigene的重组慢病毒。用病毒感染HepG2细胞,72 h后用嘌呤霉素筛选。用real-time PCR法检测miR-152基因的表达。结果构建的重组质粒经双酶切验证和测序比对鉴定正确;该质粒转染293T细胞获取的慢病毒滴度达7.5×107TU/mL;用病毒感染HepG2细胞,感染效率达70%以上。药物筛选10 d后,获得的过表达株miR-152表达量比正常细胞高近10倍。结论成功构建人miR-152基因慢病毒载体质粒pGIPZ-miR-152,并筛选出miR-152过表达细胞株,为后续实验奠定基础。
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| 关 键 词： | miR-152 慢病毒载体 HepG2细胞 |
| 收稿时间： | 2012/9/17 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2012/11/24 0:00:00 |
Construction of has-miR-152 lentiviral vector and screening of cell strain for stable expression |
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| FENG Yue-ying,XU Xiao-qin,LIN Hu,SHI Chun-mei,JI Chen-bo,GUO Xi-rong,FU Jun-fen.Construction of has-miR-152 lentiviral vector and screening of cell strain for stable expression[J].Chinese Journal of Clinical Laboratory Science,2013,31(1):20-23. |
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| Authors: | FENG Yue-ying XU Xiao-qin LIN Hu SHI Chun-mei JI Chen-bo GUO Xi-rong FU Jun-fen |
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| Institution: | 1(1.Department of Endocrinology,the Children′s Hospital of Zhejiang University School of Medicine,Hangzhou 310003,Zhejiang,China;2.Department of Pediatrics,Nanjing Maternity and Child Health Hospital of Nanjing Medical University,Nanjing 210004,Jiangsu,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | has-miR-152 lentivirus vector HepG2 cell |
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