小鼠OCILrP2基因的克隆、原核表达及抗血清的制备

目的：在原核系统中表达破骨细胞抑制凝集素家族成员之一OCILrP2基因,并制备大鼠抗OCILrP2的抗血清。方法：应用RT-PCR从小鼠脾细胞中克隆的部分OCILrP2cDNA,构建重组表达载体pET-28a-OCILrP2,并转化大肠杆菌BL21（DE3）,以IPTG诱导表达His-OCILrP2融合蛋白。以表达产物免疫SD大鼠,制备大鼠抗OCILrP2的抗血清。采用Western blot测定其效价和特异性。结果：RT-PCR法扩增出235bp的OCILrP2基因,其cDNA序列与GenBank中登录的序列一致。以构建的重组质粒pET-28a-OCILrP2转化大肠杆菌获得目的蛋白的高表达。以表达的His-OCILrP2融合蛋白免疫大鼠获得抗小鼠OCILrP2的抗血清。Western blot分析表明,该抗血清均可与原核表达的His-OCILrP2融合蛋白和真核表达的OCILrP2-Ig融合蛋白特异性结合;抗血清的效价为1∶2000。结论：在原核细胞中表达了小鼠的OCILrP2蛋白,制备了大鼠抗小鼠OCILrP2的抗血清,为进一步研究OCIL-rP2的生物学功能奠定了基础。