| 丙型肝炎病毒非结构蛋白3的体外表达与纯化 |
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| 引用本文： | 金博,李楠,吴凯,张林,王艳梅,翟俊山,朱超慧,宋久刚. 丙型肝炎病毒非结构蛋白3的体外表达与纯化[J]. 中华临床医师杂志(电子版), 2012, 6(20): 6238-6241 |
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| 作者姓名： | 金博 李楠 吴凯 张林 王艳梅 翟俊山 朱超慧 宋久刚 |
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| 作者单位： | 解放军第309医院消化内科 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目(30670960) |
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| 摘 要： | 目的构建丙型肝炎病毒非结构蛋白3(HCV NS3)表达质粒并在大肠杆菌中表达其全长蛋白。方法克隆HCV NS3的核酸序列3420-5312位点,插入pQE-11质粒的BamH1限制性酶切位点,将此重组质粒转入大肠杆菌表达,用Westernblot方法筛选阳性克隆,将含有额外拷贝的argU、ileY和leuW的tRNA基因的pACYA质粒引入HCV NS3表达系统以提高HCV NS3蛋白的表达量。收集培养扩增的大肠杆菌菌体,用卵白溶菌酶裂解,收集含有HCV NS3重组蛋白的不溶性包涵体,将包涵体充分洗涤后,溶于含10mmol/L二硫苏糖醇的缓冲液中。释放的可溶性蛋白用SDS-PAGE电泳分离、洗脱,用离心过滤方法浓缩,乙醇沉淀,重复洗涤去除内毒素。结果用此方法克隆的HCVNS3全长基因片段表达的重组蛋白分子量为69kD。含有额外拷贝的argU、ileY和leuW的tRNA基因的pACYA质粒引入HCV NS3表达系统后,HCV NS3蛋白的产出率可提高10倍以上。此方法生产的NS3纯化蛋白质产量,每升培养物为40mg。内毒素含量低于20EU/mg NS3蛋白。结论 HCV NS3与HCV的免疫逃逸及感染的慢性化有密切关系,是HCV的抗病毒治疗和疫苗研究的重要靶点,全长HCV NS3蛋白的体外合成为HCV研究提供了一个有用的工具。
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| 关 键 词： | 肝炎病毒属 病毒非结构蛋白质类 重组蛋白质类 |
In vitro expression and purification of hepatitis C virus non-structural protein 3 |
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| JIN Bo,LI Nan,WU Kai,ZHANG Lin,WANG Yan-mei,ZHAI Jun-shan,ZHU Chao-hui,SONG Jiu-gang. In vitro expression and purification of hepatitis C virus non-structural protein 3[J]. Chinese Journal of Clinicians(Electronic Version), 2012, 6(20): 6238-6241 |
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| Authors: | JIN Bo LI Nan WU Kai ZHANG Lin WANG Yan-mei ZHAI Jun-shan ZHU Chao-hui SONG Jiu-gang |
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| Affiliation: | .Department of Gastroenterology,The 309th Hospital of PLA,Beijing 100091,China |
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| Abstract: | |
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