人内皮-单核活化多肽-2的重组表达及其活性鉴定

目的: 采用原核表达系统重组表达抗肿瘤细胞因子——人内皮单核活化多肽2（endothelail monocyteactivating polypeptide Ⅱ, EMAPⅡ）,并探讨重组EMAPⅡ的抗肿瘤生物学活性。方法: 采用pMAL p2x表达系统和BL21菌株克隆表达人EMAPⅡ147312, 对表达产物进行纯化。以发光底物法测定重组EMAPⅡ介导人脐静脉内皮细胞ECV304产生组织因子的活性；以流式细胞术测定其增强ECV304细胞对于TNFα致凋亡的敏感性；以MTT法检测定其对胰腺癌SW1990细胞增殖的抑制效果。结果:测序证实EMAPⅡ编码序列被正确克隆进表达载体，经诱导表达、纯化，获得重组EMAPⅡ产物，每克菌体（湿重）可获得约500 μg的重组蛋白，纯度为电泳纯。重组EMAPⅡ在体外培养条件下可使ECV304细胞产生TF因子；并可增强ECV304细胞对于TNFα介导凋亡的敏感性，使凋亡率明显增加\(16.6±2.5)％vs（25.6±2.3）%,P<0.01\];在一定的质量浓度(1 μg/ml)下，EMAPⅡ对SW1990细胞的增殖有一定抑制作用(P<0.05)。结论:本研究采用原核表达系统pMAL-p2x可表达高纯度的重组EMAPⅡ，该因子具有良好的抗肿瘤生物学活性。