| 人热休克蛋白70在毕赤酵母中的表达及鉴定 |
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| 引用本文： | 马杰,焦平,宿晓云,贺巾超,杨莉莉,王建秋,耿学军,范伟全,魏传宇,张英,罗琳,孔宁,颜炜群. 人热休克蛋白70在毕赤酵母中的表达及鉴定[J]. 中国老年学杂志, 2005, 25(5): 516-518 |
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| 作者姓名： | 马杰 焦平 宿晓云 贺巾超 杨莉莉 王建秋 耿学军 范伟全 魏传宇 张英 罗琳 孔宁 颜炜群 |
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| 作者单位： | 吉林大学再生医学研究所,吉林,长春,130021 |
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| 摘 要： | 目的在毕赤酵母(pichiapastoris)中高效表达人热休克蛋白70(hHSP70),制备具有天然与hHSP70相同结构和活性的重组hHSP70(rhHSP70)。方法用PCR法自人DNA文库中克隆hHSP70的DNA,构建真核表达载体pPICZα/hHSP70。经核酸测序确证后,电转化毕赤酵母菌株X33。用PCR法筛选Zeocin抗性的转染阳性克隆,Westernblot法鉴定甲醇诱导的培养上清液中的rhHSP70,筛选高表达工程菌。结果经PCR法克隆的hHSP70DNA序列与GeneBank登录的cDNA序列一致。将hHSP70DNA定向插入pPICZα,构建pPICZα/hHSP70真核表达载体并经电转化获得Zeocin抗性的转染阳性克隆。SDSPAGE和Westernblot分析显示了甲醇诱导的培养基上清中含有rhHSP70,分子量72kD。氨基酸序列分析证实rhHSP70氨基端15个氨基酸与天然rhHSP70完全一致。rhHSP70表达量高达250mg·L-1。结论获得高效表达rhHSP70的毕赤酵母工程菌。
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| 关 键 词： | 重组人热休克蛋白70（rhHSP70） 基因表达 毕赤酵母 |
| 文章编号： | 1005-9202(2005)05-0516-03 |
| 修稿时间： | 2004-12-29 |
Expression and identification of recombinant human heat shock protein70 in pichia pastoris |
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| MA Jie,JIAO Ping,SU Xiao-Yun,et al.. Expression and identification of recombinant human heat shock protein70 in pichia pastoris[J]. Chinese Journal of Gerontology, 2005, 25(5): 516-518 |
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| Authors: | MA Jie JIAO Ping SU Xiao-Yun et al. |
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| Affiliation: | MA Jie,JIAO Ping,SU Xiao-Yun,et al .The Institute of Regeneration Medical Sciences of Jilin University,Changchun 130021,Jilin,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | rhHSP70 (recombinant human heat shock protein 70) Gene expression Pichia pastoris |
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