蛋白激酶A抑制剂对血小板膜糖蛋白I bα表达及血小板功能的影响

目的 探讨蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)对血小板膜糖蛋白(Glycoprotein,GP)I bα表达的调控作用.方法 用健康人洗涤血小板与PKA抑制剂H89温育.用Westem blot检测血小板悬液中GP I bα的酶切片段糖萼蛋白(glycocalicin,GC),并用流式细胞术检测GP I bα的膜表达量.用Western blot检测血小板骨架蛋白的酶切程度来确定钙依赖蛋白酶(calpain)活性,并用流式细胞术检测血小板表面calpain的表达.用血小板聚集仪检测PKA抑制剂H89对瑞斯托霉素诱导的血小板聚集功能的影响.结果 洗涤血小板经H89处理后,血小板表面GP I bα被酶切并释放于血小板悬液中,使血小板表面GP I bα的表达水平显著降低(P＜0.05).多种calpain抑制剂与血小板预温育均可减少GP I bα的酶切程度,表明PKA抑制剂所致的酶切是calpain依赖性的.肌动蛋白结合蛋白(actin-bindingprotein,ABP)和踝蛋白(talin)的酶切表明calpain可被PKA抑制剂激活,流式细胞术结果 表明calpain在血小板表面有所表达.血小板经PKA抑制剂处理后,瑞斯托霉素诱导的聚集功能受到抑制.结论 抑制血小板PKA活性,可导致calpain依赖性的GP I bα酶切,使GP I bα膜表达量减低,并导致GP I bα依赖的血小板聚集功能减低.